Dissertações/Teses

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2302
Dissertações
1
  • OLÍVIA CAROLINE MAIA DE MOURA
  • AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIBACTERIANA DA CHALCONA (2E) - 3 -({4-[(2E) -3-(4-NITROFENIL) PROP-2-ENOL] FENIL}CARBAMOIL) PROP-2-ÁCIDO ENOICO E DA SUA AÇÃO FRENTE A CEPA DE Staphylococcus aureus PORTADORA DE BOMBA DE EFLUXO

  • Orientador : FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • MEMBROS DA BANCA :
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • JANAÍNA ESMERALDO ROCHA
  • KAMILA CAMARA CORREIA
  • Data: 12/12/2302

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  • O surgimento e a disseminação de microrganismos resistentes têm levantado preocupações de uma iminente crise global de doenças infecciosas. Aliado a isso, nos últimos anos o aumento de microrganismos resistentes tem sido maior do que a introdução de novas alternativas terapêuticas capazes de combatê-los. Entre os microrganismos resistentes mais importantes destaca-se a Staphylococcus aureus, bactéria Gram-positiva responsável por causar um aumento nas infecções. A alta capacidade que esse patógeno apresenta de adquirir e acumular mecanismos de resistência o torna particularmente preocupante. As bombas de efluxo são conhecidos mecanismos que mediam a resistência de S. aureus a diversas classes de antibióticos. Desse modo, diversos estudos tem sido realizados a fim de encontrar novas alternativas terapêuticas com atividade antibacteriana e que sejam capazes de inativar esse mecanismo de resistência. Nesse contexto, as chalconas mostram-se compostos promissores, em virtude da facilidade de síntese, grande número de atividades biológicas e poucos efeitos colaterais tóxicos. Este trabalho se propôs a avaliar a atividade antibacteriana da chalcona (2E) -3-({4-[(2E) -3-(4-nitrofenil) prop-2-enol] fenil} carbamoil) prop-2-ácido enóico, denominada CAP, bem como a sua ação em cepa de Staphylococcus aureus K2068 portadora da bomba de efluxo MepA. A determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi realizada através da metodologia de microdiluição em caldo e a análise da ação da chalcona sobre a bomba de efluxo foi realizada utilizando o brometo de etídio como marcador. Os resultados obtidos neste estudo demonstraram que a chalcona CAP não foi capaz de potencializar a ação do antibiótico ciprofloxacina assim como também não foi capaz de inibir a bomba de efluxo.


  • Mostrar Abstract
  • The emergence and spread of resistant microorganisms have raised concerns of a looming global infectious disease crisis. In addition, in recent years the increase in resistant microorganisms has been greater than the introduction of new therapeutic alternatives capable of combating them. Among the most important resistant microorganisms is Staphylococcus aureus, a Gram-positive bacterium responsible for causing an increase in infections. The high capacity of this pathogen to acquire and accumulate resistance mechanisms makes it particularly worrisome. Efflux pumps are known mechanisms that mediate the resistance of S. aureus to several classes of antibiotics. Thus, several studies have been carried out in order to find new therapeutic alternatives with antibacterial activity and that are capable of inactivating this resistance mechanism. In this context, chalcones show promise compounds, due to their ease of synthesis, a large number of biological activities and few toxic side effects. The aim of this study was to evaluate the antibacterial activity of chalcone (2E)-3-({4-[(2E)-3-(4-nitrophenil)prop-2-enol]phenyl}carbamoyl)prop-2-enoic acid, called CAP, as well  as its action on Staphylococcus aureus K2068 strain carrying the MepA efflux pump. The determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was performed through the broth microdilution methodology and the analysis of chalcone on the efflux pump was performed using ethidium bromide as a maker. These results obtained in this study showed that chalcone CAP was not able to potentiate the action of the antibiotic ciprofloxacin and was not able to inhibit the efflux pump.

2024
Dissertações
1
  • AGLEDISON VIEIRA DO NASCIMENTO
  • AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTI-PROMASTIGOTA DA LECTINA DE Canavalia ensiformis (L.) DC (CONA) FRENTE AS CEPAS DE Leishmania amazonensis

  • Orientador : CLAUDIO GLEIDISTON LIMA DA SILVA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • PAULA MONALISA NOGUEIRA
  • CLAUDENER SOUZA TEIXEIRA
  • CLAUDIO GLEIDISTON LIMA DA SILVA
  • MARIA DO SOCORRO VIEIRA DOS SANTOS
  • RACQUEL OLIVEIRA DA SILVA SOUZA
  • Data: 15/03/2024

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  • As leishmanioses são caracterizadas como um conjunto diverso de afecções infecciosas causadas por protozoários parasitas do gênero Leishmania. Nesta célula eucariótica, o lipofosfoglicano (LPG) é o principal glicoconjugado presente na superfície externa da membrana plasmática. Esta molécula possui importante polimorfismo intra e interespecífico, sendo crucial para o desenvolvimento e sobrevivência do parasita em seus hospedeiros. Os tratamentos das leishmanioses são baseados em fármacos que possuem consideráveis efeitos colaterais e alto custo. Neste cenário, surgem os produtos naturais que são fontes alternativas relevantes de novos compostos que apresentam aplicações biotecnológicas. Dentro deste contexto, destacam-se as lectinas, proteínas de origem não imune capazes de se ligarem de forma específica e reversível a resíduos de carboidratos ou glicoconjugados livres ou ligados a superfícies celulares. O presente estudo teve por objetivo avaliar a atividade anti-promastigota da lectina de Canavalia ensiformis (ConA) frente as cepas de Leishmania amazonensis. Formas promastigotas das cepas PH8 e Josefa de L. amazonensis foram incubadas com diferentes concentrações de ConA (298 - 4,65 μg/mL) e a viabilidade celular determinada por contagem em câmara de Neubauer, como também a participação do domínio de reconhecimento a carboidratos (DRC) na atividade da lectina. Ensaios de fluorescência com o diacetato de 2’,7’-diclorodihidrofluoresceina (DCFH2-DA), Iodeto de Propídio (IP) e Rodamina 123 (Rho123) foram realizados a fim de verificar a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), danos a integridade da membrana celular e potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm), respectivamente. Ensaio com catalase foi aplicado para avaliar o efeito do H2O2 extracelular na ação da lectina. ConA inibiu o crescimento de formas promastigotas de maneira concentração e tempo dependentes, com CI50/24h = 56,48 ± 0,02 μg/mL; CI50/48h = 54,34 ± 0,03 μg/mL; CI50/72h = 39,61 ± 0,02 μg/mL, para cepa Josefa, e CI50/24h = 21,05 ± 0,02 μg/mL; CI50/48h = 14,08 ± 0,01 μg/mL; CI50/72h = 13,90 ± 0,01 μg/mL, para a cepa PH8. A atividade anti-promastigota da ConA deve-se a sua capacidade de reconhecer e se ligar a glicoconjugados presentes na superfície das cepas de L. amazonensis, levando a produção de EROs e danos a integridade da membrana do parasita, todavia, sem a participação de H2O2 extracelular e sem causar danos ao potencial de membrana mitocondrial. Os resultados sugerem que a lectina ConA pode ser uma alternativa promissora para o tratamento das leishmanioses, bem como para testes in vivo relacionados às cepas de L. amazonensis.


  • Mostrar Abstract
  • Leishmaniasis is characterized as a diverse set of infectious diseases caused by protozoan parasites of the genus Leishmania. In this eukaryotic cell, lipophosphoglycan (LPG) is the main glycoconjugate present on the outer surface of the plasma membrane. This molecule has important intra- and interspecific polymorphism, being crucial for the development and survival of the parasite in its hosts. Leishmaniasis treatments are based on drugs that have considerable side effects and are high cost. In this scenario, natural products emerge as relevant alternative sources of new compounds that have biotechnological applications. Within this context, lectins stand out, proteins of non-immune origin capable of binding in a specific and reversible way to carbohydrate residues or glycoconjugates free or attached to cell surfaces. The present study aimed to evaluate the anti-promastigote activity of the Canavalia ensiformis lectin (ConA) against Leishmania amazonensis strains. Promastigote forms of L. amazonensis strains PH8 and Josefa were incubated with different concentrations of ConA (298 - 4.65 μg/mL) and cell viability was determined by counting in a Neubauer chamber, as well as the participation of the carbohydrate recognition domain (DRC) on lectin activity. Fluorescence assays with 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH2-DA), Propidium Iodide (IP) and Rhodamine 123 (Rho123) were carried out in order to verify the production of reactive oxygen species (ROS), damage cell membrane integrity and mitochondrial membrane potential (ΔΨm), respectively. Catalase assay was applied to evaluate the effect of extracellular H2O2 on lectin action. ConA inhibited the growth of promastigotes in a concentration- and time-dependent manner, with IC50/24h = 56.48 ± 0.02 μg/mL; IC50/48h = 54.34 ± 0.03 μg/mL; IC50/72h = 39.61 ± 0.02 μg/mL, for Josefa strain, and IC50/24h = 21.05 ± 0.02 μg/mL; IC50/48h = 14.08 ± 0.01 μg/mL; IC50/72h = 13.90 ± 0.01 μg/mL, for strain PH8. The anti-promastigote activity of ConA is due to its ability to recognize and bind to glycoconjugates present on the surface of L. amazonensis strains, leading to the production of ROS and damage to the integrity of the parasite membrane, however, without the participation of extracellular H2O2 and without causing damage to the mitochondrial membrane potential. The results suggest that the ConA lectin may be a promising alternative for the treatment of leishmaniasis, as well as for in vivo tests related to L. amazonensis strains.
Teses
1
  • JULIO CESAR SILVA
  • Análise FTIR e atividade antimicrobiana do ácido molibdico, molibdato de potássio, tungstato de cálcio e tungstato de sódio

  • Orientador : FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • MEMBROS DA BANCA :
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • JANAÍNA ESMERALDO ROCHA
  • KAMILA CAMARA CORREIA
  • MARIA KAROLLYNA DO NASCIMENTO SILVA LEANDRO
  • THIAGO SAMPAIO DE FREITAS
  • Data: 13/03/2024

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  • A descoberta e utilização dos antibióticos permitiu o tratamento das infecções e redução dos índices de mortalidade associado aos patógenos bacterianos. No entanto, de maneira simultânea, estes patógenos progrediram para resistência aos antibióticos. Somado a isto, hoje já não são mais produzidos antibióticos como no século anterior e isso se deve aos custos e rentabilidade em comparação à fabricação de outros fármacos. Estes determinantes suscitam a necessidade de se desenvolver novas alternativas terapêuticas. Por muito tempo as políticas públicas de saúde recorreram às drogas de último recurso ou a aumento das concentrações farmacológicas dos antibióticos, mas estas estratégias, apesar de imediatas, são insuficiente e encarecem o tratamento das infecções, além de resultar no aumento de efeitos adversos. Com isso, para ser considerado promissor um fármaco precisa ter uma estrutura bem definida. Os polioxometalatos (POM’s) representam uma classe de compostos inorgânicos com diversidade de funções, tamanhos e composição química, características estas alvejadas atualmente. O plano de redação deste estudo se divide em dois importantes eixos: 1- a revisão integrativa e bibliométrica da literatura e 2- a realização dos ensaios de caracterização química e de atividade microbiológica. O levantamento integrativo e bibliométrico foi realizado através das bases de dados Scopus e Web of Science, através dos descritores “Polioxometalatos” e “Polioxometalatos e atividade antibacteriana”. A partir deste foram selecionados 38 e 36 artigos, respectivamente, para cada base indexada. A bibliometria apresentou a relação entre as palavras-chave dos artigos selecionados e dados acerca do acoplamento bibliográfico. O último demonstrou que, do total de estudos levantados, 27 estavam correlacionados na Scopus e 31 na Web of Science. Os gráficos de predominância permitiram verificar que as bactérias mais utilizadas nos estudos são a Escherichia coli e Staphylococcus aureus, por meio do método de microdiluição. A caracterização química dos compostos ocorreu por espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier de refletância total atenuada (ATR-FTIR), revelando um padrão de bandas para os compostos que estavam situadas entre 84-1915 cm-¹. Por meio da metodologia de microdiluição seriada, com revelação colorimétrica, os estudos microbiológicos investigaram o efeito direto dos compostos sob as bactérias de importância clínica Escherichia coli e Staphylococcus aureus, sendo verificado também o efeito subnibitório combinado aos antibióticos tradicionais. Para avaliar a inibição da atividade da betalactamase, verificou-se a capacidade dos compostos de diminuir a MIC da ampicilina contra as linhagens multirresistentes de Staphylococcus aureus K-4414 e K-4100. Os molibdatos e tungstatos não apresentaram atividade antibacteriana direta, no entanto potencializaram o efeito dos antibióticos tradicionais ampicilina e gentamicina, em diferentes circunstâncias contra as bactérias Escherichia coli 06 e Staphyloccocus aureus 10. O ácido molibdico, o molibdato de potássio, o tungstato de cálcio e tungstato de sódio inibiram o efeito de resistência apresentado pelas bactérias S. aureus-K4100 e K-4414. Dado o atual cenário de resistência, estes resultados representam novas alternativas para o tratamento de infecções bacterianas, permitindo uma melhor compreensão das propriedades dos POM’s. Estes resultados são pioneiros, em termos de publicação.


  • Mostrar Abstract
  • The discovery and use of bacteria allowed the treatment of infections and the reduction of mortality rates associated with bacterial pathogens. However, simultaneously, bacterial pathogens progressed to antibiotic resistance. Added to this, today antibiotics are no longer produced as they were in the previous century and this is due to costs and profitability compared to the manufacture of other medicines. These determinants raise the need to develop new therapeutic alternatives. For a long time, public health policies have resorted to drugs of last resort or increasing the pharmacological concentrations of antibiotics, but these strategies, despite being immediate, are insufficient and make the treatment of infections more expensive, in addition to resulting in an increase in adverse effects. Therefore, to be considered promising, a medicine needs to have a well-defined structure. Polyoxometalates (POM’s) represent a class of inorganic compounds with a diversity of functions, sizes and chemical composition, characteristics currently being targeted. The writing plan for this study is divided into two important axes: 1- an integrative and bibliometric review of the literature and 2- carrying out chemical characterization and microbiological activity tests. The integrative and bibliometric survey was carried out using the Scopus and Web of Science databases using the descriptors “Polyoxometalates” and “Polyoxometalates and antibacterial activity”. From this, 38 and 36 articles were selected, respectively, for each indexed database. Bibliometrics presented the relationship between the keywords of the selected articles and data about bibliographic coupling. The latter demonstrated that, of the total number of studies surveyed, 27 were correlated in Scopus and 31 in Web of Science. The predominance graphs allowed us to verify that the bacteria most used in studies are Escherichia coli and Staphylococcus aureus, using the microdilution method. The chemical characterization of the compounds occurred by attenuated total reflectance Fourier transform infrared spectroscopy (ATR-FTIR), revealing a pattern of bands for the compounds that were located between 84-1915 cm. Using serial microdilution methodology, with colorimetric development, microbiological studies investigated the direct effect of the compounds on the clinically important bacteria Escherichia coli and Staphylococcus aureus, and the subinhibitory effect combined with traditional antibiotics was also verified. To evaluate the inhibition of beta-lactamase activity, the ability of the compounds to reduce the MIC of ampicillin against multiresistant strains of Staphylococcus aureus K-4414 and K-4100 was verified. Molybdates and tungstates did not present direct antibacterial activity, however they potentiated the effect of the traditional antibiotics ampicillin and gentamicin, in different circumstances against the bacteria Escherichia coli 06 and Staphyloccocus aureus 10. Molybdic acid, potassium molybdate, calcium tungstate and calcium tungstate inhibited the resistance effect presented by the bacteria S. aureus-K4100 and K4414. Given the current resistance scenario, these results represent new alternatives for the treatment of bacterial infections, allowing a better understanding of the properties of POMs. These results are pioneering in terms of publication.

2
  • ANDRE OLIVEIRA SANTOS
  • Biossensores fotoeletroquímicos para lactose desenvolvidos com a lectina do macrofungo Agaricus bisporus

  • Orientador : THIAGO MIELLE BRITO FERREIRA OLIVEIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • SIMONE BARREIRA MORAIS
  • ADRIANA NUNES CORREIA
  • HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • MARCELO OLIVEIRA SANTIAGO
  • MARIA APARECIDA SANTIAGO DA SILVA
  • THIAGO MIELLE BRITO FERREIRA OLIVEIRA
  • VANESSA ERIKA ABRANTES COUTINHO
  • Data: 13/08/2024

  • Mostrar Resumo
  • Dietas ricas em produtos à base de lactose fornecem nutrientes importantes para nossa saúde, mas pessoas com intolerância à lactose enfrentam sérios efeitos adversos. O controle de qualidade rigoroso desses produtos é importante para a adesão a dietas sem lactose. Biossensores à base de lectinas para análise de carboidratos estão entre as aplicações biotecnológicas destas macromoléculas. O cogumelo Agaricus bisporus, possui uma lectina (ABL) de potencial biotecnológico, sensível a carboidratos, incluindo a lactose, possibilitando o desenvolvimento de biossensores fotoeletroquímicos para este carboidrato. Neste trabalho, desenvolveram-se biossensores para lactose contendo a ABL. A alta atividade lectínica encontrada nos extratos desse macrofungo (640 UH mL−1), mesmo em valores críticos de pH (4–10) e temperaturas (20–100 °C), permitiu seu uso direto como fonte da ABL. No primeiro biossensor, utilizou-se um eletrodo de vidro revestido com óxido de estanho dopado com flúor, modificada com poli(azul de metileno) e ABL, dando origem ao biossensor ABL/PMB/FTO. O poli(azul de metileno) incrementou fotoatividade ao dispositivo, aumentando a sua sensibilidade. A associação ABL-lactose, estudada por espectroscopia de impedância eletroquímica foram bem ajustadas pela equação de Hill, expandindo a faixa dinâmica de trabalho (lactose de 15–540 nM; limite de detecção de 20,2 pM). Este dispositivo apresentou boa precisão, especificidade e seletividade para análise de lactose. No segundo biossensor, utilizou-se carbono vítreo modificado com poli(betaciclodextrina), nanocelulose, nanopartículas de molibdato de cério e ABL, originando o biossensor GCE/β-CD/CeMo/ABL. Foi adotado a análise por componentes principais (PCA) para a seleção de dados de múltiplas frequências para as curvas de associação. Dados computacionais para a imobilização da ABL a partir do seu extrato mostraram que esse procedimento contribuiu para reduzir o potencial de banda plana a uma magnitude equivalente à obtida com a irradiação de luz azul.  Para as análises por PCA, os dados normalizados do módulo da impedância possibilitaram a melhor separação entre os níveis de lactose e a menor dispersão dos dados. As curvas de associação para frequências entre 3,1 e 31,6 Hz foram ajustadas pelo modelo de associação bifásica. A junção destes dados àqueles obtidos com o biossensor ABL/PMB/FTO, incluindo dados de PCA permitiu determinar três eventos de associação, com constantes de dissociação . O biossensor GCE/β-CD/CeMo apresentou elevada sensibilidade (limite de detecção de 0,4 pM), mesmo em condições de pH e temperatura atípicas para materiais proteicos, sem prejuízos à seletividade para a lactose.


  • Mostrar Abstract
  • Diets rich in lactose-based products provide important nutrients for our health, but people with lactose intolerance face serious adverse effects. Rigorous quality control of these products is important for adherence to lactose-free diets. Lectin-based biosensors for carbohydrate analysis are among the biotechnological applications of these macromolecules. The mushroom Agaricus bisporus contains a lectin (ABL) with biotechnological potential, featuring interaction sites for carbohydrates, including lactose, allowing the development of photoelectrochemical biosensors for this carbohydrate. In this study, lactose biosensors containing ABL were developed. The high lectin activity found in extracts from this macrofungus (640 UH mL−1), even at critical pH values (4–10) and temperatures (20–100 °C), enabled its direct use as a source of ABL. In the first biosensor, a glass electrode coated with fluorine-doped tin oxide, modified with poly(methylene blue) and ABL, was used, resulting in the ABL/PMB/FTO biosensor. The poly(methylene blue) enhanced the photoactivity of the device, allowing the identification of lectin-carbohydrate interactions with even greater sensitivity. The dose-response curves studied by electrochemical impedance spectroscopy were well-fitted by the Hill equation, expanding the dynamic working range (lactose from 15–540 nM; detection limit of 20.2 pM). This device exhibited signal stability, precision, specificity, and selectivity for lactose analysis. In the second biosensor, glassy carbon modified with poly(beta-cyclodextrin), nanocellulose, cerium molybdate nanoparticles, and ABL was used, resulting in the GCE/β-CD/CeMo/ABL biosensor. Additionally, the principal component analysis (PCA) method was adopted to select data from multiple frequencies for the association curves. Computational data for the immobilization of ABL from its extract showed that this procedure also contributed to reducing the flat band potential to a magnitude equivalent to that obtained with GCE/β-CD/CeMo irradiation. For PCA analyses, normalized impedance modulus data provided the best separation between lactose levels and the least data dispersion. The association curves for frequencies between 3.1 and 31.6 Hz were fitted by the biphasic association model. By associating these data, those obtained with the ABL/PMB/FTO biosensor and PCA analysis, three association events were found with dissociation constants equals to . The GCE/β-CD/CeMo biosensor exhibited high sensitivity (detection limit of 0.4 pM), even in atypical pH and temperature conditions for protein materials, without compromising the selectivity for lactose.


2023
Dissertações
1
  • ROBERTA DÁVILA PEREIRA DE LIMA
  • Efeito do ácido indolacético na tolerância ao estresse salino em Urochloa brizantha
    cultivar piatã

  • Orientador : JUAN CARLOS ALVAREZ PIZARRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JUAN CARLOS ALVAREZ PIZARRO
  • SÉRGIO LUIZ FERREIRA DA SILVA
  • AIALA VIEIRA AMORIM.
  • Data: 15/02/2023

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  • Urochloa brizantha cultivar piatã é uma forrageira tropical amplamente cultivada por
    seu valor nutritivo e adaptabilidade a solos de baixa fertilidade. Entretanto, o cultivo
    dessa gramínea apresenta-se ameaçado quando em solos com elevados níveis de sais. A
    salinidade altera o equilíbrio iônico e o estado redox da planta, provocando alterações
    que contribuem à perda de produtividade vegetal. Neste sentido, fazem-se necessários
    métodos para amenizar os efeitos gerados pelo estresse salino, sendo a aplicação de
    hormônios vegetais uma forma eficiente para tais fins. A proposta do presente estudo é
    avaliar as respostas de tolerância ao estresse salino em U. brizantha quando tratadas
    com o ácido indolacético (AIA). Inicialmente foram conduzidos experimentos para
    selecionar uma concentração adequada do hormônio (50, 200 e 800 µM) via aplicação
    foliar em plantas submetidas ao estresse salino com NaCl a 100 mM . Foram feitas
    análises de crescimento pela passagem e medidas de comprimento dos tecidos aéreos e
    radiculares, determinação dos teores de sódio e potássio por fotômetria de chama, e
    metodologias espectrofotométricas para análise de conteúdos de clorofilas,
    carotenoides, prolina e peroxidação lipídica. Os resultados evidenciaram que em
    menores concentrações de AIA houve uma melhor regulação dos teores de Na + ,
    aumento no conteúdo dos pigmentos fotossintéticos e redução de prolina em plantas
    estressadas. Sendo assim foi desenvolvido um segundo experimento com a aplicação
    foliar de 50 µM de AIA quando plantas foram, desta vez, submetidas ao estresse salino
    com NaCl a 75 mM. Nesse experimento foram avaliados os mesmos parâmetros que no
    anterior, com a inclusão de análises de conteúdo relativo de água, vazamento de
    eletrólitos quantificação de peróxido de hidrogênio e atividade das enzimas catalase
    (CAT), guaiacol peroxidase (POD) e superóxido dismutase (SOD). A atividade
    enzimática da POD também foi avaliada por zimografia. Os resultados mostraram que o

    tratamento com AIA em plantas estressadas não promoveu o crescimento vegetal nem
    indução de atividade enzimática, entretanto foi constatado a redução do vazamento de
    eletrólitos, peroxidação lipídica e peróxido de hidrogênio, bem como a diminuição dos
    teores de sódio e retenção de potássio nas folhas do capim piatã, revelando uma possível
    participação do AIA na regulação da homeostase iônica. Conclui-se que o AIA induziria
    a tolerância ao estresse salino em U. brizantha ao agir sobre processos que controlam o
    transporte de sódio e potássio aos tecidos aéreos.


  • Mostrar Abstract
  • Urochloa brizantha cultivar piatã is a tropical forage widely cultivated for its nutritive
    value and adaptability to low fertility soils. However, the growth of this forage grass is
    threatened when soils contain high levels of salts. Salinity alters the ionic balance and
    the redox state of the plant, causing alterations that contribute to the loss of plant
    productivity. In this sense, reliable methods are needed to mitigate the effects generated
    by saline stress, and the application of plant hormones is an efficient way for such
    purposes. The aim of this study is to evaluate the salt stress tolerance responses in U.
    brizantha when treated with indoleacetic acid (IAA). Initially, experiments were carried
    out to select an adequate concentration of the hormone (50, 200 and 800 µM) via foliar
    application in plants subjected to saline stress with NaCl at 100 mM. Analysis of growth
    by weighing and length measurements of aerial and root tissues, determination of
    sodium and potassium contents by flame photometry, and spectrophotometric
    methodologies for analysis of chlorophyll, carotenoid, proline and lipid peroxidation
    contents were carried out. The results showed that at lower concentrations of AIA there
    was a better regulation of Na+ levels, an increase in the content of photosynthetic
    pigments and a reduction of proline in stressed plants. Therefore, a second experiment
    was developed with the foliar application of AIA at 50 µM in plants subjected to saline
    stress with NaCl at 75 mM. In this experiment, the analyzed parameters in previous
    experiment were evaluated and it were included the follow analysis: relative water
    content, electrolyte leakage, content of hydrogen peroxide and enzyme activity of
    catalase (CAT), guaiacol peroxidase (POD) and superoxide dismutase (SOD). POD
    enzymatic activity was also evaluated by zymography. The results showed that
    treatment with AIA in stressed plants did not promote plant growth and stimulate
    enzyme activity, however it was observed a reduction in electrolyte leakage, lipid
    peroxidation and hydrogen peroxide, as well as a decrease in sodium levels and
    potassium retention in piatã grass leaves, revealing a possible participation of AIA in
    the regulation of ionic homeostasis. It is concluded that AIA would induce salt stress
    tolerance in U. brizantha by acting on processes that control sodium and potassium
    transport to the aerial tissues.

2
  • RIZELLE DE OLIVEIRA BARROS
  • Diversidade e patogenicidade dos grupos de anastomose de Rhizoctonia associados à aliáceas no Brasil

  • Orientador : SAMI JORGE MICHEREFF
  • MEMBROS DA BANCA :
  • MARUZANETE PEREIRA DE MELO
  • ALICE MARIA GONÇALVES SANTOS
  • ELIANE MAYUMI INOKUTI
  • JUAN CARLOS ALVAREZ PIZARRO
  • SAMI JORGE MICHEREFF
  • Data: 27/02/2023

  • Mostrar Resumo
  • Vários fatores podem ocasionar perdas na produção das aliáceas (alho, alho-poró, cebola e
    cebolinha comum), mas as doenças são muito importantes. Dentre estas destacam-se o
    tombamento de plântulas, a podridão basal das folhas e nanismo de plantas adultas, causadas
    por fungos do gênero Rhizoctonia. A identificação desse fungo se baseia, principalmente, na
    classificação em grupos de anastomose de hifas (AGs). O presente estudo teve como objetivo
    determinar quais espécies e AGs de Rhizoctonia ocorrem em áreas de cultivo de aliáceas no
    Brasil usando sequenciamento da região espaçadora transcrita interna (ITS) do DNA
    ribossômico (rDNA). Plantas de alho, alho-poró, cebola e cebolinha comum com sintomas de
    tombamento de plântulas, podridão basal das folhas e nanismo de plantas adultas foram
    coletadas em 38 áreas de produção localizadas em 22 municípios e cinco estados brasileiros, no
    período de 2018 a 2022. Dos materiais vegetais sintomáticos foram efetuados isolamentos dos
    fungos associados e obtidas culturas puras de Rhizoctonia. Foram obtidos 49 isolados de
    Rhizoctonia das áreas de produção de aliáceas. O DNA genômico foi extraído de todos os
    isolados de Rhizoctonia e efetuada a amplificação por PCR da região ITS-rDNA com os
    primers ITS1 e ITS4. Os produtos da PCR foram purificados e sequenciados. Sequências
    nucleotídicas de isolados de referência de Rhizoctonia obtidas no GenBank foram incluídas nas
    análises e as relações filogenéticas foram analisadas pelo método de Máxima Verossimilhança.
    A análise filogenética da região ITS permitiu agrupar 44 dos 49 isolados de Rhizoctonia em
    cinco AGs, sendo três de Rhizoctonia binucleada (AGA-A, AG-F e AG-K) e dois de
    Rhizoctonia multinucleada, especificamente R. solani (AG-4 HGI e AG-4 HGIII). Cinco
    isolados foram identificados como Rhizoctonia binucleada mas não se agruparam com nenhum
    AG descrito. Esse é o primeiro relato, em nível mundial, da associação de AG-F, AG-K e AG-
    4 HGI com alho, de AG-A, AG-F e AG-4 HGIII com alho-poró, de AG-F com cebola e de
    AG-A e AG-F com cebolinha comum. Houve predominância de AG-A (40,8% dos isolados),
    amplamente distribuído nas áreas brasileiras de produção e associado a todas as espécies de
    aliáceas aqui estudadas. Isolados representativos dos AGs constatados foram inoculados em
    cebola e houve diferença significativa nos níveis de agressividade. Esse é o primeiro relato
    detalhado da composição dos AGs de Rhizoctonia associados com aliáceas no Brasil.


  • Mostrar Abstract
  • Several factors can cause losses in the production of alliums (garlic, leeks, onions, and chives),
    but diseases are very important. Among these, the damping-off of seedlings, basal rot of leaves
    and dwarfing of adult plants, caused by fungi of the genus Rhizoctonia. The identification of
    this fungus is based mainly on the classification into hyphal anastomosis groups (AGs). The
    present study was undertaken to determine which Rhizoctonia species and AGs occur in
    alliums production areas in Brazil using internal transcribed spacer region (ITS) sequencing of
    ribosomal DNA (rDNA). Garlic, leeks, onions, and chives plants with damping-off of
    seedlings, basal rot of leaves and dwarfing of adult plants were collected in 38 production areas
    located in 12 municipalities and five Brazilian states from 2018 to 2022. From symptomatic
    plant materials were performed isolations of the associated fungi and
    obtained Rhizoctonia pure cultures. Forty-nine Rhizoctonia isolates were obtained from alliums
    in Brazil. Genomic DNA was extracted from all Rhizoctonia isolates, and PCR amplifications
    from the ITS-rDNA region were made with the ITS1 and ITS4 primers. PCR products were
    purified and sequenced. Nucleotide sequences from Rhizoctonia reference isolates obtained
    from GenBank were included in the analyses, and phylogenetic relationships were analyzed by
    Maximum Likelihood method. The phylogenetic analysis of the ITS region allowed grouping
    44 of the 49 Rhizoctonia isolates into five AGs, three of binucleate Rhizoctonia (AGA-A, AG-
    F, and AG-K) and two of multinucleate Rhizoctonia, specifically R. solani (AG- 4 HGI and
    AG-4 HGIII). Five isolates were identified as binucleate Rhizoctonia but did not cluster with
    any AG described. This is the first worldwide report of the association of AG-F, AG-K, and
    AG-4 HGI with garlic, of AG-A, AG-F, and AG-4 HGIII with leek, of AG-F with onion and
    AG-A and AG-F with chives. There was a predominance of AG-A (40.8% of the isolates),
    widely distributed in Brazilian production areas and associated with all allium species studied
    here. Representative isolates of the found AGs were inoculated into onions, and there was a
    significant difference in aggressiveness levels. This is the first detailed report on the
    composition of Rhizoctonia AGs associated with alliums in Brazil.

3
  • JOSÉ WELLINGTON MACÊDO VIANA
  • EFEITO INIBITÓRIO DE LECTINAS DE LEGUMINOSAS SOBRE O CRESCIMENTO DE FUNGOS FITOPATOGÊNICOS

  • Orientador : KAMILA CAMARA CORREIA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ANA PAULA OLIVEIRA DE BARROS
  • CLAUDENER SOUZA TEIXEIRA
  • ELIANE MAYUMI INOKUTI
  • IVNA RIBEIRO SALMITO MELO
  • KAMILA CAMARA CORREIA
  • SAMI JORGE MICHEREFF
  • Data: 13/04/2023

  • Mostrar Resumo
  • Lectinas são proteínas bioativas naturais encontradas em bactérias, fungos, animais e plantas, capazes de interagir com oligossacarídeos, monossacarídeos e glicoconjugados por meio de um domínio de reconhecimento a carboidratos. Lectinas de plantas, especialmente as das leguminosas, têm sido extensivamente estudadas por apresentarem variados efeitos biológicos, incluindo a capacidade de inibir o crescimento de fungos. Em virtude de sua atividade fungicida e da biodegradabilidade, lectinas vegetais podem ser empregadas no controle das doenças causadas por fungos fitopatogênicos. Diante disso, este trabalho buscou avaliar o efeito inibitório das lectinas de Vatairea macrocarpa (VML) e de Parkia platycephala (PPL) sobre o crescimento dos fungos fitopatogênicos Colletotrichum okinawense, C. siamense, Lasiodiplodia theobromae e Rhizoctonia solani AG-4 HGI. Para tanto, as lectinas foram purificadas por cromatografia de afinidade, liofilizadas e testadas quanto à pureza por SDS-PAGE e à atividade hemaglutinante. Para testar o efeito inibitório das lectinas, os isolados fúngicos foram cultivados em meio BDA contendo VML (1000 μg/mL) e PPL (100 e 200 μg/mL), separadamente. Como controles positivos, foram usados os fungicidas pencicurom e tiofanato metílico. Placas contendo somente BDA foram utilizadas como testemunhas. O crescimento de C. siamense (isolado CMM 4081) reduziu com a utilização de tiofanato metílico e da lectina PPL a 200 μg/mL, sem diferirem entre si, mas diferindo dos demais tratamentos. Na presença da lectina PPL a 200 μg/mL, o crescimento do isolado CMM 2295 de L. theobromae foi inferior ao observado na testemunha. A lectina VML foi efetiva na redução do crescimento micelial do isolado CMM 4039 de L. theobromae, assemelhando-se ao observado com a utilização de tiofanato metílico. As lectinas VML e PPL não apresentaram atividade inibitória sobre o crescimento de C. okinawense e R. solani. A atividade inibitória dessas lectinas pode ser espécie-dependente em relação a Colletotrichum e isolado-dependente em relação a L. theobromae. Os resultados estimulam futuras pesquisas com lectinas visando a obtenção de formulações para o controle das doenças causadas por fungos em plantas na pós-colheita.


  • Mostrar Abstract
  • Lectins are natural bioactive proteins found in bacteria, fungi, animals, and plants, capable of interacting with oligosaccharides, monosaccharides, and glycoconjugates through a carbohydrate recognition domain. Plant lectins, especially those from legumes, have been extensively studied because they have various biological effects, including the ability to inhibit fungal growth. Due to their fungicidal activity and biodegradability, plant lectins can be used to control diseases caused by phytopathogenic fungi. Therefore, this work sought to evaluate the inhibitory effect of lectins from Vatairea macrocarpa (VML) and Parkia platycephala (PPL) on the growth of phytopathogenic fungi Colletotrichum okinawense, C. siamense, Lasiodiplodia theobromae and Rhizoctonia solani AG-4 HGI. Therefore, the lectins were purified by affinity chromatography, lyophilized, and tested for purity by SDS-PAGE and hemagglutinating activity. To test the inhibitory effect of lectins, fungal isolates were cultured in PDA medium containing VML (1000 μg/mL) and PPL (100 and 200 μg/mL), separately. As positive controls, pencycuron and methyl thiophanate fungicides were used. Plates containing only BDA were used as controls. The growth of C. siamense (isolate CMM 4081) reduced with the use of methyl thiophanate and PPL lectin at 200 μg/mL, without differing from each other, but differing from the other treatments. In the presence of the PPL lectin at 200 μg/mL, the growth of the L. theobromae isolate CMM 2295 was lower than that observed in the control. The VML lectin effectively reduced the mycelial growth of the L. theobromae isolate CMM 4039, similar to that observed with methyl thiophanate. The VML and PPL lectins did not show inhibitory activity on the growth of C. okinawense and R. solani. The inhibitory activity of these lectins can be species-dependent regarding Colletotrichum and isolated-dependent in relation to L. theobromae. The results encourage future research with lectins aimed at obtaining formulations to control diseases caused by fungi in post-harvest plants.

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  • GLEDSON FERREIRA MACÊDO
  • CARACTERIZAÇÃO DA FAUNA FLEBOTÔMICA NO MUNICÍPIO DE BARBALHA, CEARÁ, BRASIL, POSSIVELMENTE ENVOLVIDA NA TRANSMISSÃO VETORIAL DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA – LTA

  • Orientador : CLAUDIO GLEIDISTON LIMA DA SILVA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUIS RAFAEL LEITE SAMPAIO
  • CLAUDIO GLEIDISTON LIMA DA SILVA
  • LAURA HEVILA INOCENCIO LEITE
  • MARIA DO SOCORRO VIEIRA DOS SANTOS
  • Data: 29/09/2023

  • Mostrar Resumo
  • As leishmanioses são doenças vetoriais de grande impacto no cenário da saúde pública,
    estando presente em mais de 98 países, sendo responsáveis pela exposição de
    aproximadamente 350 milhões de pessoas. Os vetores exercem importante papel no ciclo
    biológico da doença. Dada a importância dessa endemia, em particular da forma cutânea,
    os aspectos entomológicos dos flebotomíneos transmissores da Leishmaniose
    Tegumentar Americana (LTA) e o agente etiológico foram estudados no município de
    Barbalha – CE. Durante o período de janeiro e dezembro de 2022 foram realizadas coletas
    de amostras das lesões de pacientes atendidos no Ambulatório de Especialidades Médicas
    da Faculdade de Medicina da Universidade Federal do Cariri e coletas sistematizadas dos
    flebotomíneos no domicílio e peridomicílio desses pacientes, sendo avaliadas e
    classificadas as espécies dos insetos vetores, complementado por análises moleculares
    direcionadas ao gênero Leishmania spp.. A captura dos flebotomíneos foi realizada com
    armadilhas luminosas CDC (Centers for Disease Control), instaladas no intradomicílio e
    peridomicílio dos pacientes diagnosticados com LTA. Os vetores coletados foram triados
    e posteriormente classificados de acordo com o sexo e a espécie. Foram coletados 1091
    flebotomíneos, sendo 510 (46,7%) machos e 581 (53,3%) fêmeas, com 11 espécies
    classificadas do gênero Lutzomyia, assim discriminadas: L. longipalpis (15%), L. sallesi
    (0,7%), L. lenti (6,8 %), L. sordellii (0,3 %), L. intermedia (39,1 %), L. quinquefer (1,4%),
    L. goiana (1,9%), L. whitmani (30,5%), L. evandroi (0,3%), L. migonei (1,0%) e L.
    walqueri (3%). Os dados obtidos permitem concluir que a fauna flebotômica em Barbalha
    é diversa e difere em alguns padrões dos dados das demais região do estado do Ceará e
    que estudo complementar para caracterizar a(s) espécie(s) envolvidas na transmissão
    complementará o presente ensaio.


  • Mostrar Abstract
  • Leishmaniasis are vector diseases that have a major impact on the public health scenario,
    being present in more than 98 countries and responsible for the exposure of approximately
    350 million people. Vectors play an important role in the biological cycle of the disease.
    Given the importance of this endemic, particularly the cutaneous form, the entomological
    aspects of the sandflies that transmit American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) and the
    etiological agent were studied in the municipality of Barbalha – CE. During the period of
    January and December 2022, samples were collected from lesions of patients treated at
    the Medical Specialties Outpatient Clinic of the Faculty of Medicine of the Federal
    University of Cariri and systematic collections of sandflies were carried out in the homes
    and surroundings of these patients, evaluating and classifying the species of vector
    insects, complemented by molecular analyzes directed to the genus Leishmania spp.. The
    capture of sandflies was carried out using CDC (Centers for Disease Control) light traps,
    installed in the intra-domestic and non-domestic homes of patients diagnosed with ACL.
    The collected vectors were screened and subsequently classified according to sex and
    species. A total of 1091 sandflies were collected, 510 (46.7%) males and 581 (53.3%)
    females, with 11 species classified as the genus Lutzomyia spp., broken down as follows:
    L. longipalpis (15%), L. sallesi (0.7 %), L. lenti (6.8 %), L. sordellii (0.3 %), L. intermedia
    (39.1 %), L. quinquefer (1.4%), L. goiana (1.9 %), L. whitmani (30.5%), L. evandroi
    (0.3%), L. migonei (1.0%) and L. walqueri (3%). The data obtained allow us to conclude
    that the phlebotomy fauna in Barbalha is diverse and differs in some patterns from data
    from other regions of the Ceará state and that a complementary study to characterize the
    species(s) involved in transmission of ACL will complement the present essay.

5
  • HERYKA REGINA ABRANTES DA COSTA
  •  Sensor eletroquímico à base de molibdato de cério e nanotubos de carbono para a avaliação da estabilidade termo-oxidativa da azitromicina

     


  • Orientador : THIAGO MIELLE BRITO FERREIRA OLIVEIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • MARIA APARECIDA SANTIAGO DA SILVA
  • THIAGO MIELLE BRITO FERREIRA OLIVEIRA
  • Data: 04/12/2023

  • Mostrar Resumo
  • A azitromicina (AZT) está entre os antibióticos mais bem-sucedidos e altamente prescritos no mundo, sendo utilizada no tratamento de primeira linha para infecções do trato respiratório, doenças sexualmente transmissíveis, infecções dérmicas e outras manifestações bacterianas. Entretanto, para os casos em que se faz necessário medir os níveis do princípio ativo em matrizes complexas, ou ainda, quando se quer estudar a reatividade e estabilidade da molécula, o número de possibilidades analíticas com os requisitos necessários para estas finalidades ainda é limitado. Neste trabalho, uma proposta inovadora foi desenvolvido com um sensor eletroquímico à base de molibdato de cério (Ce2(MoO4)3) e nanotubos de carbono de parede múltiplas (MWCNT) integrados em uma pasta condutora de carbono. Apesar da elevada reatividade dos materiais presentes no dispositivo resultante (Ce2(MoO4)3-MWCNT/EPC) para analisar a oxidação do antibiótico, dados experimentais e simulações computacionais revelaram que a solubilidade e eletroatividade do antibiótico melhoram em eletrólito alcalino (pH = 8) preparado em mistura binária de CH3OH/H2O (10:90%, v/v). A resistência de transferência de carga e, consequentemente, a sensibilidade do dispositivo também melhorou após o tratamento térmico de Ce2(MoO4)3-MWCNT/EPC, como forma de eliminar a água reticular contida nos microcristais de molibdato. Há evidências de que a oxidação do antibiótico sobre o sensor eletroquímico ocorre de forma irreversível, com indícios de liberação de 2e da desosamina. Após a otimização dos parâmetros eletroanalíticos, foi possível detectar AZT com limite de detecção de 230 nm, além de alta precisão dos resultados, demonstrada por desvios de resultados abaixo de 4,5%. O dispositivo mostrou aplicabilidade para avaliar a estabilidade termo-oxidativa da AZT sob condições variadas de temperatura, radiação ultravioleta e saturação ao ar atmosférico. Os resultados fortalecem a ideia de que o controle de qualidade dos medicamentos à base de AZT deve ser feito de forma contínua, em padrões laboratoriais não-ideais e mais próximos daqueles observados durante o transporte, armazenamento e administração dos produtos, como forma de fazer uma avaliação mais rigoroso da validade e viabilidade do ingrediente ativo nas formulações, assim como zelar pela saúde dos consumidores.


  • Mostrar Abstract
  • Azithromycin (AZT) is among the most successful and highly prescribed antibiotics in the world, being used in first-line treatment for respiratory tract infections, sexually transmitted diseases, dermal infections, and other bacterial manifestations. However, when it is necessary to measure the levels of this active ingredient in complex matrices, or even when you want to study the reactivity and stability of the molecule, the number of analytical possibilities with the necessary requirements for these purposes is still limited. In this work, an innovative proposal was developed with an electrochemical sensor based on cerium molybdate (Ce2(MoO4)3) and multi-walled carbon nanotubes (MWCNT) integrated into a conductive carbon paste. Despite the high reactivity of the materials present in the resulting device (Ce2(MoO4)3-MWCNT/EPC) to analyze the oxidation of the antibiotic, experimental data and computational simulations revealed that the solubility and electroactivity of the antibiotic improve in alkaline electrolyte (pH = 8) prepared in a binary mixture of CH3OH/H2O (10:90%, v/v). The charge transfer resistance and, consequently, the sensitivity of the device also improved after the heat treatment of Ce2(MoO4)3-MWCNT/EPC, as a way to eliminate the reticular water contained in the molybdate microcrystals. There is evidence that the oxidation of the antibiotic on the electrochemical sensor occurs irreversibly, losing 2e of desosamine. After optimizing the electroanalytical parameters, it was possible to detect AZT with a detection limit of 230 nm, in addition to high precision of the results, demonstrated by results deviations below 4.5%. The device showed applicability to evaluate the thermo-oxidative stability of AZT under varying conditions of temperature, ultraviolet radiation and atmospheric air saturation. The results strengthened the idea that quality control of AZT-based medicines must be carried out continuously, using non-ideal laboratory standards and closer to those observed during transport, storage and administration of the products, as a way of making a more rigorous assessment of the validity and viability of the active ingredient in formulations, as well as ensuring the health of consumers.

Teses
1
  • ALINE MARIA BRITO LUCAS
  • EFEITOS DA RESTRIÇÃO CALÓRICA NA FUNÇÃO CARDÍACA, MITOCONDRIAL E NO ESTADO REDOX DURANTE A HIPERTROFIA CARDÍACA INDUZIDA POR ISOPROTERENOL IN VIVO.

  • Orientador : HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ANA CATARINA REZENDE LEITE
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • IRWIN ROSE ALENCAR DE MENEZES
  • ROGERIO DE AQUINO SARAIVA
  • THIAGO MIELLE BRITO FERREIRA OLIVEIRA
  • Data: 07/07/2023

  • Mostrar Resumo
  • A hipertrofia cardíaca é caracterizada pelo aumento do tamanho do coração
    decorrente de estímulos intracelulares adquiridos de uma sobrecarga de pressão ou
    volume. Embora seja uma resposta adaptativa e transitória, frequentemente evolui
    para um quadro de insuficiência cardíaca congestiva, ocasionando falha cardíaca.
    Disfunções mitocondriais estão envolvidas no desenvolvimento de patologias
    cardíacas e que geralmente são associadas com defeitos na cadeia de transporte de
    elétrons, sobrecarga de Ca2+, reativação de genes cardíacos e principalmente, pelo
    aumento de estresse oxidativo. Por outro lado, a restrição calórica (RC) é uma
    intervenção nutricional que protege contra a hipertrofia cardíaca por diminuição do
    estresse oxidativo e melhora da função mitocondrial. Neste estudo, será mostrado que
    esta intervenção dietética previne a elevação das proteínas cardíacas, evita a
    reprogramação do fator natriurético atrial e bloqueia o aumento do índice de peso do
    coração por comprimento da tíbia (mg/cm), parâmetros observados em corações
    hipertróficos. Esses resultados sugerem que a RC inibe o crescimento patológico
    cardíaco, ao mesmo tempo em que reduz a formação de peróxido de hidrogênio
    induzida pelo transporte reverso de elétrons mitocondrial e melhora o conteúdo
    mitocondrial. Adicionalmente, a RC atenuou a abertura do mPTP induzida por Ca2+ em
    mitocôndrias isoladas de camundongos tratados com isoproterenol. Além disso, a RC
    bloqueou a correlação negativa de enzimas antioxidantes (atividade de superóxido
    dismutase e glutationa peroxidase), levando à manutenção dos níveis de proteína
    sulfidrilas e glutationa. Dada a natureza da hipertrofia cardíaca induzida por
    isoproterenol, foi investigado se a RC pode alterar a sensibilidade β-adrenérgica
    cardíaca. Assim, usando corações de ratos isolados em um sistema de Langendorff, foi visto que ratos com RC (semelhante aos controles) preservaram a sinalização β-adrenérgica. Em contrapartida, corações de ratos hipertróficos (tratados por sete dias com isoproterenol) foram insensíveis à ativação β-adrenérgica com isoproterenol (50 nM). Esses resultados indicam que a RC possui efeitos benéficos contra a cardiomiopatia hipertrófica e podem contribuir para prevenção e/ou tratamento de complicações relacionadas a hipertrofia cardíaca e outras doenças cardiovasculares.


  • Mostrar Abstract
  • Cardiac hypertrophy is characterized by an increase in heart size due to intracellular
    stimuli acquired from pressure or volume overload. Although it is an adaptive and
    transient response, it often evolves into congestive heart failure, causing heart failure.
    Mitochondrial dysfunctions are involved in the development of cardiac pathologies and
    are generally associated with defects in the electron transport chain, Ca2+ overload,
    reactivation of cardiac genes and, mainly, increased oxidative stress. On the other
    hand, calorie restriction (CR) is a nutritional intervention that protects against cardiac
    hypertrophy by decreasing oxidative stress and improving mitochondrial function. In
    this study, it will be shown that this dietary intervention prevents the elevation of cardiac
    proteins, avoids the reprogramming of the atrial natriuretic factor and blocks the
    increase in the index of heart weight per length of the tibia (mg/cm), parameters
    observed in hypertrophic hearts. These results suggest that CR inhibits pathological
    cardiac growth while reducing mitochondrial reverse electron transport-induced
    hydrogen peroxide formation and improving mitochondrial content. Additionally, RC
    attenuated Ca2+-induced mPTP opening in mitochondria isolated from mice treated

    with isoproterenol. In addition, CR blocked the negative correlation of antioxidant
    enzymes (superoxide dismutase and glutathione peroxidase activity), leading to the
    maintenance of sulfhydryl and glutathione protein levels. Given the nature of
    isoproterenol-induced cardiac hypertrophy, we investigated whether CR could alter
    cardiac β-adrenergic sensitivity. Thus, using isolated rat hearts in a Langendorff
    system, it was seen that rats with CR (similar to controls) preserved β-adrenergic
    signaling. In contrast, hypertrophic rat hearts (treated for seven days with
    isoproterenol) were insensitive to β-adrenergic activation with isoproterenol (50 nM).
    These results indicate that CR has beneficial effects against hypertrophic
    cardiomyopathy and may contribute to the prevention and/or treatment of
    complications related to cardiac hypertrophy and other cardiovascular diseases.

2
  • VANESSA ERIKA ABRANTES COUTINHO
  • LECTINAS DE Ganoderma applanatum E Canavalia ensiformis COMO ELEMENTOS DE BIORRECONHECIMENTO ELETROQUÍMICO PARA GLICOSE

  • Orientador : THIAGO MIELLE BRITO FERREIRA OLIVEIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • FRANCISCO ADRIANO DE OLIVEIRA CARVALHO
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • TATIANE SANTI GADELHA
  • THIAGO MIELLE BRITO FERREIRA OLIVEIRA
  • Data: 07/07/2023

  • Mostrar Resumo
  • Os carboidratos são as moléculas orgânicas mais abundantes do planeta, sendo importantes
    em mecanismos de reconhecimento e interação intercelular e para a saúde. Diferentes formas
    de controle dos níveis de glicose tem sido alvo de muitas pesquisas que visam facilitar e/ou
    aprimorar a detecção desse monossacarídeo em fluidos biológicos, alimentos e formulações
    comerciais. Devido à capacidade de ligação reversível e específica a carboidratos, as lectinas
    são proteínas que vêm ganhando espaço como moléculas de reconhecimento no
    desenvolvimento de biossensores eletroquímicos para glicose. As lectinas de leguminosa são
    amplamente estudadas e caracterizadas, sendo a lectina isolada de Canavalia ensiformes
    (ConA) a mais conhecida desse grupo. Pela diversidade de propriedades de acordo com a
    fonte de obtenção, as lectinas de fungos também mostram potencial biotecnológico. A espécie
    Ganoderma applanatum, por exemplo, apresenta uma lectina (GAL) com afinidade por
    glicose e que apresenta resistência moderada a variações de pH (4 - 8) e temperatura (20 – 60
    ºC), embora com atividade hemaglutinante melhor conservada em condições fisiológicas.
    Neste trabalho foram desenvolvidos dois sistemas de biorreconhecimento para glicose com a
    ConA e a GAL, utilizando eletrodo de carbono vítreo (GCE) modificado com o
    hexacianometalato Azul da Prússia (PB) que, além de ser um material semicondutor, possui
    regiões de densidade eletrônica heterogêneas e adequadas para a adsorção das proteínas,
    através de ligações intermoleculares. Os resultados obtidos por diferentes técnicas
    comprovaram que o problema de instabilidade do PB em pH fisiológico pode ser solucionado
    por tratamento térmico a 100 ºC por 1h, levando ao suporte eletródico de ta-PB/GCE. O uso
    de inteligência artificial associado a parâmetros eletroquímicos possibilitou estudos estruturais
    e a obtenção de dados sobre as condições biocompatíveis e eletrostaticamente favoráveis para
    imobilização da GAL em ta-PB/GCE, que também foram úteis nos estudos com a ConA. O
    biossensor GAL/ta-PB/GCE apresentou ótimo desempenho eletroquímico para a
    quantificação de glicose em condições ideais, alcançando um limite de detecção de 10,2 pM e
    sensibilidade de 0,012 µA µM ‒1 cm ‒2 . A performance obtida com ConA/ta-PB/GCE foi
    satisfatória, alcançando um limite de detecção de 0,96 µM e sensibilidade de 3,94 × 10 3 µA
    µM ‒1 cm ‒2 . A seletividade dos ensaios foi influenciada por outros carboidratos, incluindo
    frutose, maltose e sacarose, provavelmente pela regiosseletividade moderadamente baixa
    alcançada com sítios de interação superficiais dessas proteínas, mas sem comprometer a
    viabilidade dos dispositivos para a eletroanálise de glicose em amostras complexas. Ambos os
    biossensores foram testados para a quantificação de glicose em formulações farmacêuticas, alcançando valores de recuperação entre 98,0% e 100,5%. O biossensor ConA/ta-PB/GCE foi aplicado com êxito para a análise de açúcares totais em amostra de refrigerante. Cada dispositivo apresentou vantagens particulares e desafios que ainda demandam mais estudos, porém o conjunto de figuras de mérito obtido em cada sistema comprovou que as plataformas desenvolvidas são verdadeiramente eficientes para a análise de glicose em diferentes amostras, estimulando mais pesquisas com o desenvolvimento de biossensores eletroquímicos à base de lectinas para carboidratos de relevância biológica.


  • Mostrar Abstract
  • Carbohydrates are the most abundant organic molecules on the planet, being important in
    mechanisms of intercellular recognition and interaction and for health. Different ways of
    controlling glucose levels have been the subject of much research aimed at facilitating and/or
    improving the detection of this monosaccharide in biological fluids, foods and commercial
    formulations. Due to their ability to reversibly and specifically bind carbohydrates, lectins are
    proteins that have been gaining ground as a recognition star in the development of
    electrochemical glucose biosensors. Legume lectins are widely studied and characterized,
    with the basic lectin from Canavalia ensiformes (ConA) being the best-known of this group.
    Due to the diversity of properties according to the source of production, fungal lectins also
    show biotechnological potential. The species Ganoderma applanatum, for example, has a
    lectin (GAL) with an affinity for glucose and which is moderately resistant to variations in pH
    (4 - 8) and temperature (20 – 60 ºC), although with a hemagglutinating activity that is better
    preserved under physiological conditions. In this work, two biorecognition systems for
    glucose were developed with ConA and GAL, using a glassy carbon electrode (GCE)
    modified with hexacyanometalate Prussian Blue (PB) which, in addition to being a
    semiconductor material, has heterogeneous electron density regions and suitable for the
    adsorption of proteins, through intermolecular bonds. The results obtained by different
    techniques proved that the problem of PB instability at physiological pH can be solved by
    thermal treatment at 100 ºC for 1h, leading to the electrode support of ta-PB/GCE. The use of
    artificial intelligence associated with electrochemical parameters allowed structural studies
    and the collection of data on biocompatible and electrostatically favorable conditions for
    immobilization of GAL in ta-PB/GCE, which were also useful in studies with ConA. The
    GAL/ta-PB/GCE biosensor showed excellent electrochemical performance for glucose
    quantification under ideal conditions, reaching a detection limit of 10.2 pM and sensitivity of
    0.012 µA µM ‒1 cm ‒2 . The performance obtained with ConA/ta-PB/GCE was satisfactory,
    reaching a detection limit of 0.96 µM and sensitivity of 3.94×10 3 µA µM ‒1 cm ‒2 . The
    selectivity of the assays was influenced by other carbohydrates, including fructose, maltose
    and sucrose, probably due to the moderately low regioselectivity achieved with surface
    interaction sites of these proteins, but without compromising the viability of the devices for
    the electroanalysis of glucose in complex samples. Both biosensors were tested for glucose
    quantification in pharmaceutical formulations, achieving recovery values between 98.0% and

    100.5%. The ConA/ta-PB/GCE biosensor was successfully applied for the analysis of total
    sugars in a soft drink sample. Each device presented particular advantages and challenges that
    still require further studies, but the set of figures of merit obtained in each system proved that
    the platforms developed are truly efficient for the analysis of glucose in different samples,
    stimulating further research with the development of electrochemical biosensors based on
    lectins for carbohydrates of biological relevance.

3
  • CICERA ÉDNA BARBOSA DAVID
  • INVESTIGAÇÃO DOS EFEITOS DA RESTRIÇÃO CALÓRICA SOBRE O ESTRESSE OXIDATIVO, A FUNÇÃO MITOCONDRIAL E O LIPIDOMA DURANTE A HIPERTROFIA CARDÍACA INDUZIDA POR ISOPROTERENOL EM CAMUNDONGOS

  • Orientador : HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JANAÍNA ESMERALDO ROCHA
  • ANNA LIDIA NUNES VARELA
  • FRANCISCO ASSIS BEZERRA DA CUNHA
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • Data: 27/07/2023

  • Mostrar Resumo
  • A hipertrofia cardíaca é uma resposta compensatória do coração frente a um aumento de volume ou pressão arterial. Embora seja inicialmente uma resposta benéfica, frequentemente, leva à cardiomiopatia hipertrófica e à insuficiência cardíaca. Estudos apontam que a hipertrofia cardíaca induz um shift metabólico levando a um consumo preferencial de glicose em relação aos ácidos graxos.  A restrição calórica, um procedimento dietético que promove benefícios à saúde e prolonga a expectativa de vida em muitos organismos, produz efeitos que envolvem melhora no metabolismo energético e estresse oxidativo, no qual as mitocôndrias desempenham um papel central. Neste trabalho, levantou-se a hipótese de que parte dos efeitos benéficos da restrição calórica se dá por alterações no conteúdo lipídico, manutenção das funções mitocondriais e redox, e que somados, estes efeitos induziriam à prevenção da hipertrofia cardíaca.  A fim de investigá-los, um protocolo de indução da restrição calórica em camundongos foi realizado com base no consumo médio da dieta padrão de camundongos alimentados ad libitum durante 2 semanas. Em seguida, os animais foram divididos, aleatoriamente, em dois grupos: com ingestão ad libitum (AL), e alimentado com 60% do consumo médio de calorias (RC) durante 4 semanas adicionais. A hipertrofia cardíaca foi induzida por isoproterenol (ISO) (30 mg/ kg / dia) durante 8 dias. Camundongos tratados com ISO tiveram elevada relação peso do coração/ comprimento da tíbia e aumento da área transversal dos cardiomiócitos. Esses marcadores hipertróficos foram significantemente reduzidos em camundongos RC tratados com ISO. Mitocôndrias isoladas de corações hipertróficos produziram níveis significativamente mais altos de H2O2 (usando succinato na presença de rotenona). Este efeito foi bloqueado pela RC. Concomitantemente a hipertrofia cardíaca inibiu a atividade das enzimas, MnSOD, GPx, e GST, reduziu as taxas de controle respiratório mitocondrial e diminuiu a atividade ATPase . Esses efeitos também foram evitados pela RC.  Para obter informações sobre como a RC pode interferir nas alterações metabólicas induzidas pela hipertrofia, o lipidoma cardíaco também foi estudado. A RC protegeu contra mudanças em vários triglicerídeos (TAGs) ligados a ácidos graxos insaturado, além de proteger contra o acúmulo de TAGs contendo ácidos graxos saturados observados em amostras hipertróficas. A hipertrofia cardíaca induziu aumento de ceramidas, fosfoetanolaminas e acilcarnitinas (12:0, 14:0, 16:0 e 18:0), e promoveu dano mitocondrial observado pelo inchamento secundário à absorção de Cálcio. Estas alterações foram evitadas pela restrição calórica. Juntos, estes dados demonstram que a hipertrofia promove o estresse oxidativo, distúrbios mitocondriais, e altera o lipidoma cardíaco. Essas alterações são evitadas (pelo menos parcialmente) pela intervenção de restrição calórica in vivo. Essas descobertas podem ter implicações promissoras no desenvolvimento de novas estratégias de tratamento para proteger o coração contra a hipertrofia e suas complicações. No entanto, mais pesquisas são necessárias para aprofundar nosso entendimento sobre os mecanismos exatos pelos quais a restrição calórica exerce seus efeitos benéficos no coração.


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  • Cardiac hypertrophy is a compensatory response of the heart to an increase in volume or blood pressure. Although initially a beneficial response, it often leads to hypertrophic cardiomyopathy and heart failure. Studies indicate that cardiac hypertrophy induces a metabolic shift leading to a preferential consumption of glucose in relation to fatty acids. Caloric restriction, a dietary procedure that promotes health benefits and prolongs life expectancy in many organisms, produces effects involving improvement in energy metabolism and oxidative stress, in which mitochondria play a central role. In this work, the hypothesis was raised that part of the beneficial effects of caloric restriction is due to changes in lipid content, maintenance of mitochondrial and redox functions, and that together, these effects would induce the prevention of cardiac hypertrophy. In this work, the hypothesis was raised that part of the beneficial effects of caloric restriction is due to changes in lipid content, maintenance of mitochondrial and redox functions, and that together, these effects would induce the prevention of cardiac hypertrophy. To investigate these effects, a protocol for the induction of caloric restriction in mice was performed based on the average consumption of the standard diet of mice fed ad libitum for 2 weeks. The animals were then randomly divided into two groups: ad libitum intake (AL) and fed 60% of the mean calorie intake (CR) for an additional 4 weeks. Cardiac hypertrophy was induced by isoproterenol (ISO) (30 mg/kg/day) for 8 days. Mice treated with ISO had an increased heart weight/tibial length ratio and increased cardiomyocyte cross-sectional area. These hypertrophic markers were significantly reduced in ISO-treated CR mice. Mitochondria isolated from hypertrophic hearts produced significantly higher levels of H2O2 (when succinate was used without the presence of rotenone). This effect was blocked by CR. Concomitantly, cardiac hypertrophy inhibited the activity of enzymes, MnSOD, GPx, and GST, reduced rates of mitochondrial respiratory control and decreased the ATPase activity. These effects were also avoided by CR. To obtain information on how CR can interfere with hypertrophy-induced metabolic changes, cardiac lipidome was also studied. CR protected against changes in several triglycerides containing saturated fatty acids observed in hypertrophic samples. Cardiac hypertrophy induced an increase in ceramides, phosphoethanolamines and acylcarnitines (12:0, 14:0, 16:0 and 18:0), and promoted mitochondrial damage observed by swelling secondary to calcium absorption. These changes were prevented by caloric restriction. Together, these data demonstrate that hypertrophy promotes oxidative stress, mitochondrial disorders, and alters cardiac lipidome. These changes are prevented (at least partially) by in vivo caloric restriction intervention. These findings could have promising implications for the development of new treatment strategies to protect the heart against hypertrophy and its complications. However, more research is needed to deepen our understanding of the exact mechanisms by which calorie restriction exerts its beneficial effects on the heart.

2022
Dissertações
1
  • FLAVIA EDUARDA VIDAL BARBOSA
  • AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE LEISHMANICIDA in vitro DA LECTINA DE Dioclea Violacea MART. ex BENTH

  • Orientador : CLAUDIO GLEIDISTON LIMA DA SILVA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CLAUDENER SOUZA TEIXEIRA
  • CLAUDIO GLEIDISTON LIMA DA SILVA
  • ESTELITA LIMA CANDIDO
  • RODRIGO PEDRO PINTO SOARES
  • Data: 17/02/2022

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  • As leishmanioses são caracterizadas como um conjunto de doenças de interesse clínico e epidemiológico que possuem distribuição mundial. O tratamento para esta doença baseia-se primariamente no uso de antimoniais pentavalentes (Sb +5), sendo no Brasil utilizado o antimoniato de meglumina (Glucantime®) e em alguns casos na aplicação de drogas secundárias, como a anfotericina B. Esses medicamentos apesar de promissores, apresentam diversas limitações e importantes efeitos colaterais, o que fomenta a pesquisa por novos medicamentos que apresentem baixa toxicidade e poucos efeitos adversos. Dentro deste cenário, destacam-se as lectinas, proteínas que apresentam diversas funções nos organismos em que são encontradas. O presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito leishmanicida in vitro da lectina das sementes de D. violacea (DVL) em cultura de cepa de Leishmania infantum. Formas promastigotas foram incubadas com diferentes concentrações de DVL (324 – 5,06 μg/mL) e a viabilidade celular determinada por  contagem em câmara de Neubauer. Através determinação da CI50 foi avaliada a participação do domínio de reconhecimento a carboidratos (DRC) na atividade da lectina. Ensaios de fluorescência com o diacetato de 2’,7’-diclorodihidrofluoresceína (DCFH2-DA) e Iodeto de Propídio (IP) foram realizados a fim de verificar a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e danos a integridade da membrana celular parasitária, respectivamente. Microscopia eletrônica de varredura foi utilizada para avaliar as possíveis alterações morfológicas induzidas pela DVL em formas promastigotas. Também foi testado o efeito da associação entre a DVL e a Anfotericina B e o glucantime sobre formas promastigotas. Por meio do teste do brometo de 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il) -2,5 difeniltetrazólio (MTT) foi possível determinar a citotoxicidade da DVL em macrófagos Raw 264.7, bem como o efeito da associação desta com a anfotericina B sobre estas mesmas células. Para mais, foi verificado ainda o efeito da DVL sobre formas amastigotas da cepa de L. infantum.  DVL inibiu o crescimento de formas promastigotas de maneira concentração e tempo dependentes, com valores CI50/24h = 49,37 μg/mL; CI50/48h = 37,47 μg/mL; CI50/72h = 34 μg/mL. Os dados obtidos mostraram que a atividade da lectina esta relacionada à sua capacidade de reconhecer e se ligar a glicanos presentes em L. infantum e o tratamento com esta é capaz de induzir a produção de EROs, danos a integridade da membrana celular e alterações morfológicas nos parasitas. Além disto, a lectina mostrou-se capaz de modular a ação da anfotericina B e do glucantime melhorando o efeito destes em formas promastigotas.  DVL não apresentou citotoxicidade em células Raw 264.7, demonstrando um aumento da viabilidade destas células, efeito também observado na avaliação da associação entre a DVL e a anfotericina B sobre as células. Ademais, com o uso da CI50 (50 μg/mL) foi possível observar uma redução no índice de sobrevivência dos macrófagos infectados com formas amastigotas, bem como uma redução no percentual de infecção dos mesmos. Os resultados sugerem que a DVL é uma ferramenta promissora para o tratamento das leishmanioses, entretanto mais estudos são necessários para elucidar os prováveis mecanismos de ação.


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  • The leishmaniases are characterized as a set of diseases of clinical and epidemiological interest with worldwide distribution. The treatment for this disease is based primarily on the use of pentavalent antimonials (Sb +5), which in Brazil is the meglumine antimonate (Glucantime®) and in some cases the application of secondary drugs such as amphotericin B. These drugs, despite being efficient, present several problems in their use and important side effects, which encourages the search for new drugs that present low toxicity and few adverse effects. Within this scenario, lectins stand out as proteins that have several functions in the organisms where they are found. The present study aimed to evaluate the in vitro leishmanicidal effect of lectin from D. violacea seeds (DVL) in Leishmania infantum strain culture. Promastigote forms were incubated with different concentrations of DVL (324 - 5.06 μg/mL) and cell viability was assessed by counting in a Neubauer chamber. From the determination of the CI50 the participation of the carbohydrate recognition domain (CRD) in the lectin activity was evaluated. Fluorescence assays with 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH2-DA) and propidium iodide (PI) were performed in order to verify the production of reactive oxygen species (ROS) and damage to parasite cell membrane integrity, respectively. In addition, the morphological changes induced by the DVL in promastigotes were evaluated by scanning electron microscopy. The effect of the association between the DVL and amphotericin B and glucantime on promastigotes was also tested. By means of the 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) test it was possible to determine the cytotoxicity of the DVL on Raw 264.7 macrophages, as well as the effect of its association with amphotericin B on these same cells. Furthermore, the effect of DVL on amastigotes of the L. infantum strain was also verified. DVL was able to inhibit the growth of promastigotes in a concentration and time dependent manner, with CI50/24h = 49.37 μg/mL; CI50/48h = 37.47 μg/mL; CI50/72h = 34 μg/mL. The data obtained showed that the lectin activity is related to its ability to recognize and bind to glycans present in L. infantum and treatment with it is able to induce the production of ROS, damage to cell membrane integrity and morphological changes in the parasites. Furthermore, the lectin was able to modulate the action of amphotericin B and glucantime, improving their effect on promastigotes.  DVL did not show cytotoxicity in Raw 264.7 cells, demonstrating an increase in the viability of these cells, an effect also observed in the evaluation of the association between DVL and amphotericin B on the cells. Furthermore, with the use of CI50 (50 μg/mL) it was possible to observe a reduction in the survival rate of macrophages infected with amastigotes, as well as a reduction in the percentage of infection. The results suggest that DVL is a promising alternative for the treatment of leishmaniasis, however, further studies are needed to elucidate the probable mechanisms of action.

2
  • ANTONIA RAILENE DE SOUZA RODRIGUES
  • AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIBACTERIANA DAS LECTINAS DE Canavalia maritima (AUBL.) THOUARS E Dioclea rostrata BENTH. EM CEPAS PADRÕES E MULTIRRESISTENTES DE Staphylococcus aureus E Escherichia coli

  • Orientador : FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ANNA LIDIA NUNES VARELA
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • KAMILA CAMARA CORREIA
  • ROGERIO DE AQUINO SARAIVA
  • Data: 21/02/2022

  • Mostrar Resumo
  • Lectinas atraem bastante interesse devido as suas propriedades únicas de se ligar de forma específica e reversível a glicanos sem alterar a estrutura de ambos, e aglutinar células. Devido a essas propriedades possuem diversas funções, inclusive atividade antibacteriana e moduladora. Staphylococcus aureus e Escherichia coli são micro-organismos patogênicos de grande preocupação clínica, devido as infecções nosocomiais que podem causar, além de serem resistentes a diversos medicamentos. Dessa forma, isolar biomoléculas com potencial antibacteriano é bastante promissor para possibilitar um futuro medicamento capaz de agir contra essas cepas. O objetivo desse estudo foi isolar lectinas de sementes de Dioclea rostrata (DRL) e Canavalia maritima (ConM) e testar o seu potencial antibacteriano e modulador contra cepas padrões de multirresistentes de S. aureus e E. coli. Para tanto, as lectinas DRL e ConM foram purificadas por cromatografia de afinidade em coluna Sephadex G-50. Foi realizada a atividade hemaglutinante utilizando eritrócitos de coelho a 3%, inibição da atividade hemaglutinante utilizando glicose 0.1 M e desnaturação proteica por aquecimento. Os testes microbiológicos foram realizados de forma a verificar a Concentração Inibitória Mínima capaz de inibir o crescimento bacteriano como também o teste de modulação com antibiótico. As lectinas testadas apresentaram a CIM acima ou igual a 1024 μg/mL. Não apresentando atividade clinicamente significativa sobre o crescimento bacteriano de forma direta. Foram verificados os efeitos modulatórios das lectinas ConM e DRL em combinação com os antibióticos Ampicilina, Norfloxacino e Gentamicina. A ConM mostrou efeito sinérgico, melhorando significativamente a atividade de todos os antibióticos em cepas resistentes de E. coli, no entanto mostrou-se indiferente para de S. aureus. Com a DRL também foi possível verificar um sinergismo em combinação com todos os antibióticos para E. coli, por outro lado, em S. aureus, apresentou efeito sinérgico apenas quando combinado como antibiótico gentamicina. Por fim, as lectinas do estudo foram capazes atuar de forma sinérgica em combinação com os antibióticos contra cepas resistente de S. aureus e E. coli, diminuindo suas concentrações em uso.


  • Mostrar Abstract
  • Lectins attract a lot of interest because of their unique properties to bind specifically and reversibly to glycans without changing the structure of either, and to bind cells. Due to these properties they have several functions, including antibacterial and modulating activity. Staphylococcus aureus and Escherichia coli are pathogenic microorganisms of great clinical concern, due to the nosocomial infections they can cause, besides being resistant to several drugs. Thus, isolating biomolecules with antibacterial potential is very promising to enable a future drug able to act against these strains. The aim of this study was to isolate lectins from Dioclea rostrata (DRL) and Canavalia maritima (ConM) seeds and test their antibacterial and modulatory potential against standard multidrug-resistant strains of S. aureus and E. coli. DRL and ConM lectins were purified by affinity chromatography on a Sephadex G-50 column. The hemagglutinating activity was performed using 3% rabbit erythrocytes, inhibition of hemagglutinating activity using 0.1 M glucose and protein denaturation by heating. The microbiological tests were performed in order to verify the Minimum Inhibitory Concentration capable of inhibiting bacterial growth as well as the modulation test with antibiotics. The lectins tested presented a MIC above or equal to 1024 μg/mL. They did not show clinically significant activity on bacterial growth directly. The modulatory effects of ConM and DRL lectins in combination with the antibiotics Ampicillin, Norfloxacin and Gentamicin were verified. ConM showed synergistic effect, significantly enhancing the activity of all antibiotics in resistant strains of E. coli, however it was indifferent for S. aureus. With DRL it was also possible to verify a synergism in combination with all antibiotics for E. coli, on the other hand, in S. aureus, it showed a synergistic effect only when combined with the antibiotic gentamicin. Finally, the lectins in the study were able to act synergistically in combination with the antibiotics against resistant strains of S. aureus and E. coli, lowering their concentrations in use.

3
  • DAYANNA MILCA SANTOS DE SOUZA
  • ESPÉCIES DE BOTRYOSPHAERIACEAE ASSOCIADAS À PODRIDÃO EM SERIGUELA
  • Orientador : KAMILA CAMARA CORREIA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALICE MARIA GONÇALVES SANTOS
  • ELIANE MAYUMI INOKUTI
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • KAMILA CAMARA CORREIA
  • Data: 28/02/2022

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  • A podridão peduncular é um dos principais fatores que comprometem a comercialização da seriguela. Essa doença é comumente associada a Lasiodiplodia theobromae, porém, estudos relatam outras espécies de Botryosphaeriaceae associados a esse sintoma em outras frutas. O objetivo dessa pesquisa foi identificar as espécies de Botryosphaeriaceae associadas a podridão de frutos em seriguela nos Estados de Pernambuco e Ceará. Foram coletadas seriguelas em quintais produtivos e pequenas propriedades rurais em municípios Cearenses e no estado de Pernambuco. Os frutos foram desinfestados superficialmente e colocados em câmara úmida em condições de laboratório até o aparecimento do sintoma de podridão. Os frutos com sintomas foram submetidos ao processo de isolamento. Em seguida foi realizado o teste de patogenicidade dos isolados fúngicos obtidos, estes foram avaliadas em frutos de seriguela maduros e sem sintomas de doenças. Os frutos foram lavados em água corrente, desinfestados superficialmente em solução de NaClO a 1,5% por 1 minutos e lavados com água destilada esterilizada. Após a secagem, um disco de micélio (3 mm de diâmetro) de cada isolado foi removido da margem de colônia com 5 dias de crescimento em BDA e transferido na superfície do fruto. Para a testemunha, foram utilizados discos de BDA não colonizados pelo fungo. Os isolados patogênicos foram purificados e submetidos a extração e amplificação do DNA genômico da região ITS e dos genes EF1-α e TUB. As sequências dos 79 isolados representativos foram comparadas com sequências de referência de espécies fúngica da família Botryosphaeriaceae. Os isolados se agruparam em clados com espécies de diferentes gêneros de Botryosphaeriaceae. A maioria dos isolados se agruparam com as espécies do gênero Lasiodiplodia e L. iraniensis é a espécie de Botryosphaeriaceae com maior frequência associada a podridão peduncular dos frutos de seriguela nos Estados de Permanbuco e Ceará.

  • Mostrar Abstract
  • The peduncular rot is one of the main factors that compromise the commercialization of the seriguela. This disease is commonly associated with Lasiodiplodia theobromae, however, studies report other species of Botryosphaeriaceae associated with this symptom in other fruits. The objective of this research was to identify Botryosphaeriaceae species associated with fruit rot in seriguela in the states of Pernambuco and Ceará. Seriguelas were collected in productive backyards and small rural properties in municipalities of Ceará and in the state of Pernambuco. The fruits were superficially disinfected and placed in a humid chamber under laboratory conditions until the appearance of rot symptoms. The fruits with symptoms were submitted to the isolation process. Then, the pathogenicity test of the fungal isolates was carried out, they were evaluated in mature seriguela fruits and without disease symptoms. The fruits were washed in running water, superficially disinfected in 1.5% NaClO solution for 1 minute and washed with sterilized distilled water. After drying, a disc of mycelium (3 mm in diameter) of each isolate was removed from the colony margin with 5 days of growth in PDA and transferred to the fruit surface. For the control, discs of BDA not colonized by the fungus were used. The pathogenic isolates were purified and subjected to extraction and amplification of genomic DNA from the ITS region and the EF1-α and TUB genes. The sequences of the 79 representative isolates were compared with reference sequences from fungal species of the Botryosphaeriaceae family. The isolates were grouped into clades with species of different genera of Botryosphaeriaceae. Most of the isolates were grouped with the species of the genus Lasiodiplodia and L. iraniensis is the species of Botryosphaeriaceae most frequently associated with peduncular rot of seriguela fruits in the states of Permanbuco and Ceará.
2021
Dissertações
1
  • DIMAS BATISTA DE LIMA
  • AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE LEISHMANICIDA in vitro DA LECTINA de

    Vatairea macrocarpa (Benth.) Ducke

  • Orientador : CLAUDIO GLEIDISTON LIMA DA SILVA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CLAUDENER SOUZA TEIXEIRA
  • CLAUDIO GLEIDISTON LIMA DA SILVA
  • GABRIELA SANTOS-GOMES
  • ISABEL PEREIRA DA FONSECA
  • Data: 12/04/2021

  • Mostrar Resumo
  • As leishmanioses representam um espectro de doenças negligenciadas que aflige milhões de
    indivíduos em todo o mundo. O tratamento das leishmanioses permanece o mesmo há décadas
    e consiste, particularmente, no uso de antimoniais pentavalentes. Ressalte-se, que esses
    medicamentos apresentam importantes efeitos colaterais. No cenário atual, com limitação de
    tratamentos alternativos, a investigação por outras opções é um real desafio. Produtos naturais
    são importantes fontes de compostos com diversas aplicações terapêuticas, com especial
    destaque para as lectinas. A VML (Vatairea macrocarpa Lectin), lectina extraída das
    sementes de Vatairea macrocarpa, com especificidade de reconhecimento e ligação aos
    carboidratos α-D-galactose/N-acetilgalactosamina, tem se mostrado uma ferramenta
    biotecnológica com aplicações promissoras. O presente estudo teve como objetivo avaliar, in
    vitro, o potencial leishmanicida da VML utilizando-se a Leishmania infantum. Formas
    promastigota foram incubadas com diferentes concentrações de VML (13,8 – 0,4 μM); além
    disso, a CI50 foi incubada em associação à galactose a fim de avaliar a participação do
    domínio de reconhecimento de carboidratos (CRD); a densidade celular dos parasitos foi
    determinada por contagem em câmara de Neubauer. Ensaios de fluorescência com diacetato
    de 2’,7’-diclorodihidrofluoresceína (DCFH2-DA) e Iodeto de Propídio (IP) foram realizados
    para avaliar a possibilidade do envolvimento de espécies reativas de oxigênio e danos às
    membranas como prováveis mecanismos de ação da VML. O efeito citotóxico da VML sobre
    macrófagos Raw 264.7 foi verificado através do ensaio MTT; avaliações adicionais foram
    realizadas para identificar o provável efeito da associação da VML a Anfotericina B e ao
    Glucantime sobre as formas promastigotas, bem como sua citotoxicidade sobre macrófagos
    Raw 264.7. A VML foi capaz de inibir o crescimento das formas promastigotas de maneira
    concentração e tempo dependentes, com valores CI50: CI50/24h = 11,4 ± 0,03 μM; CI50/48h
    = 6,7 ± 0,04 μM; CI50/72h = 4,7 ± 0,02 μM. Os resultados mostraram que o efeito
    leishmanicida está relacionado à capacidade da VML de reconhecer glicanos de L. infantum e
    que o tratamento dos promastigotas com VML induz estresse oxidativo e danos à membrana
    dos protozoários. Além disso, a lectina não apresentou qualquer efeito tóxico para células de
    mamíferos (Raw 264.7). A associação da VML com Anfotericina B e Glucantime melhorou a
    atividade desses fármacos, além de reverter seu efeito citotóxico nas células Raw 264.7.
    Nossos achados sugerem que VML é uma promissora alternativa para o tratamento das
    leishmanioses. Contudo, mais estudos são necessários para melhor entendimento de seu efeito
    sobre as formas amastigotas intracelulares, sua ação sobre o repertório de citocinas nas células
    imunes envolvidas na resposta anti-Leishmania, assim como seus mecanismos moleculares
    nos sistemas biológicos.


  • Mostrar Abstract
  • Leishmaniasis represents a spectrum of neglected diseases that afflict millions of people
    worldwide. The treatment of leishmaniasis has remained the same for decades and consists, in
    particular, in the use of pentavalent antimonials. It should be noted that these drugs have
    important effects. In the current scenario, with the limitation of alternative treatments,
    investigating other options is a real challenge. Natural products are important sources of
    compounds with different therapeutic applications, with special emphasis on lectins. VML
    (Vatairea macrocarpa Lectin), lectin extracted from the seeds of Vatairea macrocarpa, with
    specificity of recognition and binding to the carbohydrates α-D-galactose / N-
    acetylgalactosamine, has proved to be a biotechnological tool with promising applications.
    The present study aimed to evaluate, in vitro, the leishmanicidal potential of VML using
    Leishmania infantum. Promastigote forms were incubated with different concentrations of
    VML (13.8 - 0.4 μM); in addition, the IC50 was incubated in association with galactose in
    order to assess the participation of the carbohydrate recognition domain (CRD); the cell
    density of the parasites was determined by counting in a Neubauer chamber. Fluorescence
    assays with 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH2-DA) and Propidium Iodide
    (IP) were performed to evaluate the possibility of the involvement of reactive oxygen species
    and damage to membranes as probable mechanisms of action of VML. The cytotoxic effect of
    VML on Raw 264.7 macrophages was verified using the MTT assay; additional evaluations
    were carried out to identify the likely effect of the association of VML with Amphotericin B
    and Glucantime on promastigote forms, as well as its cytotoxicity on Raw macrophages
    264.7. VML was able to inhibit the growth of promastigote forms in a concentration and time
    dependent manner, with IC50 values: IC50 / 24h = 11.4 ± 0.03 μM; IC50 / 48h = 6.7 ± 0.04
    μM; IC50 / 72h = 4.7 ± 0.02 μM. The results showed that the leishmanicidal effect is related
    to the ability of VML to recognize glycans from L. infantum and that the treatment of
    promastigotes with VML induces oxidative stress and damage to the membrane of the
    protozoa. In addition, lectin had no toxic effect on mammalian cells (Raw 264.7). The
    association of VML with Amphotericin B and Glucantime improved the activity of these
    drugs, in addition to reversing their cytotoxic effect on Raw 264.7 cells. Our findings suggest
    that VML is a promising alternative for the treatment of leishmaniasis. However, further
    studies are needed to better understand its effect on intracellular amastigote forms, its action
    on the repertoire of cytokines in the immune cells involved in the anti-Leishmania response,
    as well as their molecular mechanisms in biological systems.

2020
Dissertações
1
  • JOANA VARLLA DE LACERDA ALEXANDRE
  • QUERCETINA ATENUA A HIPERTROFIA CARDÍACA INDUZIDA POR ISOPROTERENOL AO RESTAURAR O PODER ANTIOXIDANTE ENDÓGENO E DIMINUIR OS NÍVEIS DE H2O2

  • Orientador : HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • THIAGO MIELLE BRITO FERREIRA OLIVEIRA
  • CLAUDENER SOUZA TEIXEIRA
  • JOSÉ GALBERTO MARTINS DA COSTA
  • Data: 27/01/2020

  • Mostrar Resumo
  • O estresse oxidativo, caracterizado pelo acúmulo de espécies reativas de oxigênio (EROs), está implicado na patogênese de várias doenças, incluindo a hipertrofia cardíaca. Embora as EROs sejam essenciais para vários processos fisiológicos, quantidades excessivas podem danificar os componentes dos cardiomiócitos, comprometendo a sua função e, assim, desencadeando uma série de alterações adversas, como fibrose cardíaca, contração prejudicada, morte celular por necrose e apoptose. A cadeia de transporte de elétrons mitocondrial (CTE) é uma fonte conhecida de EROs. Como as mitocôndrias são responsáveis por cerca de 25% da massa dos cardiomiócitos, elas são consideradas uma das fontes mais significativas de EROs no coração. Dessa maneira, as mitocôndrias têm sido alvo de vários estudos que utilizam modelos de hipertrofia cardíaca. A quercetina, pertencente à classe dos flavonóides, é uma potente depuradora de EROs, tendo se tornado alvo de atenção por apresentar diversos efeitos benéficos no sistema cardiovascular, incluindo efeitos anti-hipertróficos. Neste trabalho foi testada a hipótese de que a quercetina é capaz de atenuar a hipertrofia cardíaca ao melhorar o balanço redox e a homeostase mitocondrial. Para tal, tratamos camundongos com injeções intraperitoneais de isoproterenol (30 mg/kg/dia) por 4 dias consecutivos. No quinto dia, alguns desses animais foram eutanasiados e os demais camundongos foram remanejados em dois subgrupos. A partir desse ponto, um grupo recebeu apenas isoproterenol (grupo ISO) (30 mg/kg/dia) e outro grupo recebeu isoproterenol e quercetina (grupo ISO+QUE) por via oral (10 mg/kg/dia) por mais 4 dias. Os animais tratados com ISO durante 4 dias apresentaram aumento da relação peso cardíaco/comprimento da tíbia, aumento do teor de proteínas totais, diminuição do teor de proteínas sulfidrilas, comprometimento da atividade de enzimas antioxidantes e alta produção de peróxido de hidrogênio (H2O2). A intervenção com o tratamento com quercetina a partir desse ponto foi capaz de atenuar a hipertrofia cardíaca, restabelecer os níveis de proteínas sulfidrilas e a atividade antioxidante, além de bloquear efetivamente a produção de H2O2. Além disso, observamos que o estímulo hipertrófico do isoproterenol diminui a expressão e atividade de superóxido dismutase mitocondrial (MnSOD), enquanto que a quercetina reverte esse efeito. Observamos também que a quercetina protege as mitocondrias contra a abertura do poro de transição de permeabilidade mitocondrial (mPTP) in vivo e in vitro. Em conjunto, esses resultados mostram que a quercetina é capaz de atenuar a hipertrofia cardíaca induzida por isoproterenol ao melhorar a função mitocondrial e o equilíbrio redox.


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  • Oxidative stress, characterized by the accumulation of reactive oxygen species (ROS), is implicated in the pathogenesis of several diseases, including cardiac hypertrophy. Although ROS are essentials for several physiological processes, excessive amounts may damage cardiomyocyte components, compromising their function and thus triggering a number of adverse changes such as cardiac fibrosis, impaired contraction, cell death by necrosis and apoptosis. The mitochondrial electron transport chain (ETC) is a known source of ROS. Because mitochondria account for about 25% of the mass of cardiomyocytes, they are considered one of the most significant sources of ROS in the heart. Thus, mitochondria have been the target of several studies using cardiac hypertrophy models. The flavonoid quercetin, is a potent ROS scavenger and having several beneficial effects on the cardiovascular system, including antihypertrophic effects. In this work, we tested whether quercetin could attenuate the cardiac hypertrophy by improving the redox balance and mitochondrial homeostasis. To this hypothesis we treated mice with intraperitoneal injections of isoproterenol (30 mg/kg/day) for 4 consecutive days. On the fifth day, some of these animals were euthanized and the remaining mice were relocated to two subgroups. From that point on, one group received only isoproterenol (ISO group) (30 mg/kg/dia) and another group received isoproterenol and quercetin (ISO+QUE group) orally (10 mg/kg/day) for 4 more days. The animals treated with ISO for 4 days showed increased cardiac weight/tibia length ratio, increased total protein content, decreased sulfhydryl protein content, compromised antioxidant enzyme activity and high H2O2 production. Intervention with quercetin treatment from this point on was able to attenuate cardiac hypertrophy, reestablish sulfhydryl protein levels and antioxidant activity, in addition to effectively blocking the H2O2 production. In addition, we observed that isoproterenol hypertrophic stimulation decreases mitochondrial superoxide dismutase (MnSOD) expression and activity, while quercetin reverses this effect. Quercetin also protects mitochondria against opening of mitochondrial permeability transition pore (mPTP) in vivo and in vitro. Taken together, these results show that quercetin is able to attenuate isoproterenol-induced cardiac hypertrophy by improving mitochondrial function and redox balance.

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  • RAFAEL BARBOSA DE MOURA
  • Avaliação da Atividade Antibacteriana e Modulatória das Lectinas de Canavalia ensiformis (ConA) e Canavalia brasiliensis (ConBr) frente a cepas padrões e multirresistentes.

  • Orientador : FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • MEMBROS DA BANCA :
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • KAMILA CAMARA CORREIA
  • THIAGO MIELLE BRITO FERREIRA OLIVEIRA
  • HENRIQUE DOUGLAS MELO COUTINHO
  • Data: 30/01/2020

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  • Lectinas são proteínas capazes de se ligar reversível e especificamente a carboidratos, apresentam a capacidade de aglutinar eritrócitos e são encontradas em diversos organismos, como vegetais, organismos eucariontes e procariontes. As lectinas vegetais constituem um grupo de proteínas de grande potencial biológico e representam a classe de lectinas as quais apresentam mais estudos na literatura. Nos dias atuais existe uma necessidade dos pesquisadores para o descobrimento de novas drogas que possam agir direta ou indiretamente em bactérias, visto que, clinicamente os mecanismos de resistência a antimicrobianos estão aumentando em uma escala jamais vista. A necessidade de se encontrar moléculas que possam auxiliar revertendo esses mecanismos de resistência, é de extrema necessidade atualmente. Neste contexto este trabalho tem o objetivo de isolar as lectinas presentes nas sementes da Canavalia ensiformis (ConA) e da Canavalia brasiliensis (ConBr), como também verificar seu potencial antimicrobiano frente a bactérias padrões, multirresistente e portadoras de bomba de efluxo. Para tal objetivo as sementes foram trituradas e o extrato feito em Nacl 0,15 M, para posterior extração em coluna de Sephadex-G50, onde a fase estacionária é constituída de Glicose, as proteínas foram eluídas utilizado Glicina 0,1M, pH 2,6 e as amostras lidas em espectrofotômetro a 280 nm. Posteriormente as amostras foram dialisadas e liofilizadas para os testes microbiológicos. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determina utilizando cepas de Staphylococcus aureus e Escherichia coli, as cepas foram mantidas em meio específico para comprovar o seu subtipo. A CIM foi realizada em microplacas estéreis com 96 poços e foram diluídas seriadamente 1:1. A avaliação da atividade modulatória foi feita utilizando os antibióticos: gentamicina, ciprofloxacino e ampicilina. Para o teste de bomba de efluxo foram utilizadas duas cepas de S. aureus contendo bombas de efluxo das famílias NorA e MepA respectivamente. O estudo mostrou que as lectinas ConA e ConBr possuem uma CIM para todas as bactérias testadas acima ou igual a 1024µg/mL, não apresentando achados clinicamente significativos para este teste, no entanto, nas atividades de modulação a ConA, foi capaz de modular a atividade da gentamicina nas cepas de S. aureus selvagens (1199) e a ConBr apresentou atividade modulatória significativa para a modulação em S. aureus (1199) na presença de ciprofloxacino. A concavalina A (ConA) apresente atividade significativa para bactérias com bomba de efluxo do tipo NorA na presença de norfloxacino. Atividades semelhantes não foram clinicamente significativas para a ConBr. Com isso, conclui-se que a ConA foi capaz de modular a atividade da gentamicina em cepas gram-positivas, sugerindo-se que a estrutura dessa bactéria por apresentar grande quantidade de carboidratos em sua superfície poderá proporcionar um mecanismo de ação que pode ser auxiliado na presença de lectinas, o mesmo pode ser observado nos resultados com bombas de efluxo (NorA) em que a lectina foi capaz de auxiliar o fármaco antimicrobiano mediante a presença desse mecanismo de resistência.


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  • Lectins are proteins capable of binding reversibly and specifically carbohydrates, which have the ability to agglutinate red blood cells and are found in various organisms such as plants, organisms eukaryotes and prokaryotes. Plant lectins are a group of proteins of great biological potential and represent the class of lectins which present more studies in the literature. Nowadays there is a need for researchers to discover new drugs that can act directly or indirectly on bacteria, as clinically antimicrobial resistance mechanisms are increasing on an unprecedented scale. The need to find molecules that can help reverse these resistance mechanisms is of utmost need today. In this context, this work aims to isolate the lectins present in seeds of Canavalia ensiformis (ConA) and Canavalia brasiliensis (ConBr), as well as to verify their antimicrobial potential against standard, multidrug resistant bacteria and efflux pump carriers. For this purpose the seeds were ground and the extract made in 0.15M Nacl, for subsequent extraction in Sephadex-G50 column, where the solid phase is made of glucose, the proteins were eluted using 0.1M glycine, pH 2.6 and samples read on spectrophotometer at 280 nm. Subsequently the samples were dialyzed and lyophilized for microbiological tests. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was determined using Staphylococcusaureus and Escherichiacoli strains, the strains were kept in specific medium to prove their subtype. MIC was performed in sterile 96-well microplates and serially diluted 1:1. Modulatory activity was evaluated using the antibiotics gentamicin, ciprofloxacin and ampicillin. For the efflux pump test were used two strains of S. aureus containing NorA and MepA respectively. The study showed that ConA and ConBr lectins have a MIC for all bacteria tested above or equal to 1024µg / mL, showing no clinically significant findings for this test; however, in modulation activities ConA was able to modulate the activity of gentamicin in strains of wild S. aureus (1199) and ConBr showed significant modulatory activity for modulation in S. aureus (1199) in the presence of ciprofloxacin. Concavalin A (ConA) shows significant activity for NorA efflux pump bacteria in the presence of norfloxacin. Similar activities were not clinically significant for ConBr. Thus, it can be concluded that ConA was able to modulate gentamicin activity in gram-positive strains, suggesting that the structure of this bacterium, due to the large amount of carbohydrates on its surface, may provide a mechanism of action that can be aided. In the presence of lectins, the same can be observed in the results with efflux pumps (NorA) in which lectin was able to assist the antimicrobial drug by the presence of this resistance mechanism.

     

     

     

     

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  • PLÍNIO BEZERRA PALÁCIO
  • DIVERSIDADE E PATOGENICIDADE DE GRUPOS DE ANASTOMOSE DE RHIZOCTONIA ASSOCIADOS COM FEIJÃO-CAUPI NO CARIRI CEARENSE

  • Orientador : KAMILA CAMARA CORREIA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ELIANE MAYUMI INOKUTI
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • KAMILA CAMARA CORREIA
  • MARCOS ANTONIO PEREIRA DE LIMA
  • Data: 03/03/2020

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  • O fungo do gênero Rhizoctonia causa uma das principais doenças do feijão-caupi, a leguminosa alimentar mais importante da região Nordeste do Brasil e com grande área plantada na região do Cariri cearense. A identificação desse fungo se baseia, principalmente, na classificação em grupos de anastomose de hifas (AGs). O presente estudo teve como objetivos determinar: a) quais espécies e AGs de Rhizoctonia ocorrem em áreas de cultivo de feijão-caupi no Cariri cearense usando sequenciamento da região espaçadora transcrita interna (ITS) do DNA ribossômico (rDNA), e b) a variação em agressividade entre os isolados e AGs associados com essa leguminosa. Plantas de feijão-caupi com sintomas de podridão de colo e de raiz, típicos dos induzidos por Rhizoctonia, foram coletadas em 32 áreas de produção localizadas em 18 municípios do Cariri cearense, durante os anos de 2018 e 2019. Dos materiais vegetais sintomáticos foram efetuados isolamentos dos fungos associados e obtidas culturas puras de Rhizoctonia. Foram obtidos 41 isolados de Rhizoctonia das áreas de feijão-caupi no Cariri cearense. O DNA genômico foi extraído de todos os isolados de Rhizoctonia e efetuada a amplificação por PCR da região ITS-rDNA com os primers ITS1 e ITS4. Os produtos da PCR foram purificados e sequenciados. Sequências nucleotídicas de isolados de referência de Rhizoctonia obtidas no GenBank foram incluídas nas análises e as relações filogenéticas foram analisadas pelo método de Máxima Verossimilhança. A patogenicidade e a agressividade de isolados representando os AGs identificados foram testados em plantas de feijão-caupi. A análise filogenética da região ITS permitiu a identificação de quatro AGs, sendo dois de R. solani (AG-4 HGI e AG-4 HGIII) e dois de Rhizoctonia binucleada (AG-Fa e AG-L). Esse é o primeiro relato, em nível mundial, da associação de AG-4 HGIII, AG-Fa e AG-L com feijão-caupi. AG-4 HGI foi o mais frequente (53,7%), estando amplamente distribuído no Cariri cearense. Entre os municípios produtores de feijão-caupi nessa região, Mauriti apresentou a maior diversidade de AGs (AG-4 HGI, AG-4 HGIII e AG-Fa). Todos os isolados foram patogênicos ao feijão-caupi e houve diferença na agressividade entre os diferentes isolados dentro do mesmo AG de Rhizoctonia. Para nosso conhecimento, esse é o primeiro relato detalhado da composição dos AGs de Rhizoctonia associados ao feijão-caupi no Cariri cearense e amplia os conhecimentos sobre esse assunto no Brasil e no mundo.


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  • The fungus of the genus Rhizoctonia causes one of the main diseases of cowpea, the most important food legume in the Northeast of Brazil and with large planted area in the Cariri cearense region. The identification of this fungus is based mainly on the classification into hyphal anastomosis groups (AGs). The present study was undertaken to determine: a) which Rhizoctonia species and AGs that occur in cowpea production areas in Cariri cearense using internal transcribed spacer region (ITS) sequencing of ribosomal DNA (rDNA), and b) the variation in aggressiveness among the different AGs associated with this legume. Cowpea plants with stem and root rot symptoms, typical of those induced by Rhizoctonia, were collected in 32 production areas located in 18 municipalities of Cariri cearense, during 2018 and 2019. From symptomatic plant materials were performed isolations of the associated fungi and obtained Rhizoctonia pure cultures. Forty-one Rhizoctonia isolates were obtained from cowpea areas in Cariri cearense. Genomic DNA was extracted from all Rhizoctonia isolates and PCR amplifications from the ITS-rDNA region were made with the ITS1 and ITS4 primers. PCR products were purified and sequenced. Nucleotide sequences from Rhizoctonia reference isolates obtained from GenBank were included in the analyzes and phylogenetic relationships were analyzed by Maximum Likelihood methods. The pathogenicity and aggressiveness of isolates representing the AGs identified were tested on cowpea plants. Phylogenetic analysis of the ITS region allowed the identification of four AGs, two from R. solani (AG-4 HGI and AG-4 HGIII) and two from Rhizoctonia binucleate (AG-Fa and AG-L). This is the first report worldwide of the association of AG-4 HGIII, AG-Fa and AG-L with cowpea. AG-4 HGI was the most frequent (53.7%), being widely distributed in Cariri cearense. Among the cowpea producing municipalities in this region, Mauriti presented the highest diversity of AGs (AG-4 HGI, AG-4 HGIII and AG-Fa). All isolates were pathogenic to cowpea and there was a difference in aggressiveness between the different isolates within the same Rhizoctonia AG. To our knowledge, this is the first detailed report of the AG composition of Rhizoctonia associated to cowpea in Cariri cearense and expands the knowledge on this subject in Brazil and in the world.

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  • ANDRE OLIVEIRA SANTOS
  •  PERFIL DE CARBOIDRATOS E LIGNINA NA BIOMASSA DE CULTIVARES E ECÓTIPOS DE CAPIM-GUINEA VISANDO O POTENCIAL NA PRODUÇÃO DE ETANOL

  • Orientador : JUAN CARLOS ALVAREZ PIZARRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JUAN CARLOS ALVAREZ PIZARRO
  • KAMILA CAMARA CORREIA
  • CICERA RAQUEL FERNANDES RODRIGUES
  • Data: 06/04/2020

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  •  Espécies vegetais com bom crescimento, elevada composição em açúcares fermentáveis e baixos teores de lignina e cinzas são fontes adequadas para a obtenção de etanol. As gramíneas forrageiras são consideradas apropriadas para estes fins, devido a seu rápido crescimento e elevada produção de biomassa. Objetivou-se estudar tais características em cultivares comerciais – Tanzânia (TA), Mombaça (MO) e Aruana (AR) – e ecótipos – Assaré (AS), Barbalha (BA) e Caririaçu (CA) – coletados da região do Cariri cearense da gramínea capim-guinea. As sementes foram coletadas, desinfetadas e semeadas em vasos contendo areia de textura média com capacidade de campo de 80%. A partir do décimo quinto dia, as plantas foram irrigadas alternadamente com solução nutritiva de Hoagland de 1/3 de força iônica e água destilada. Aos 45 e 90 dias após a semeadura foram analisados parâmetros morfofisiológicos, tais como comprimento e largura da folha, número de perfilhos, calibre do colmo e transpiração. A parte aérea das plantas coletadas aos 45 dias foi dividida em: folha primária, folha secundária, colmo primário e colmo secundário e os tecidos armazenados a -20°C para análises bioquímicas. Foram analisados os teores de glicose, frutose, açúcares redutores, sacarose, amido, celulose e lignina. A biomassa total não apresentou diferenças entre os materiais estudados aos 45 dias; contudo, a biomassa da cultivar AR foi a menor aos 90 dias de cultivo. Aos 45 dias, os teores de glicose e de frutose da parte aérea total foram significativamente maiores no ecótipo AS. Em relação aos teores de frutose, ainda foram encontradas diferenças significativas nas folhas primárias e secundárias entre as cultivares e ecótipos, se destacando, novamente, o alto teor no ecótipo AS. Os teores de sacarose seguiram um padrão de acúmulo bastante heterogêneo em cada tecido da parte aérea; porém, quando analisados em conjunto se destacaram AS, TA e AR. De modo geral, os teores de celulose nos tecidos analisados foram maiores na cultivar MO e menores na cultivar AS, padrão observado também, quando analisada toda a parte aérea. Em relação à lignina, não houve diferenças nos teores em folhas primárias e colmos secundários, porém, nas folhas secundária houve diferenças significativas entre as cultivares MO e TA e, nos colmos primários, se destacou BA pelo seu baixo conteúdo. Na parte aérea total, o ecótipo CA apresentou menores teores de lignina. De uma maneira geral, o teor total de açúcares resulta principalmente da contribuição da celulose. O ecótipo AS destacou-se ao apresentar teores de açúcares solúveis e amido duas vezes superiores aos teores de açúcares estruturais. Concluiu-se que a cultivar TA e a cultivar CA seriam adequada para a produção de etanol.


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  • Plant species with high growth, high composition in fermentable sugars and low levels of lignin and ash are suitable sources for ethanol production. Forage grasses are considered appropriate for these purposes, due to their rapid growth and high biomass production. The objective of this work was to study such characteristics in commercial cultivars - Tanzânia (TA), Mombaça (MO) and Aruana (AR) - and ecotypes - Assaré (AS), Barbalha (BA) and Caririaçu (CA) – of guinea forage grass, collected from the Cariri region, Ceará. Seeds were collected, disinfected and sown in pots containing medium texture sand with an 80% field capacity. From the On fifteenth day, plants were irrigated alternately with Hoagland's nutrient solution of 1/3 ionic strength and distilled water. On 45 and 90 days after sowing, morphophysiological parameters (leaf length and width, number of tillers, stem caliber and transpiration) were analyzed. The shoots of the plants on 45 days were collected and divided into: primary leaf, secondary leaf, primary stem and secondary stem and the tissues were stored at -20 ° C for biochemical analysis. Levels of glucose, fructose, reducing sugars, sucrose, starch, cellulose and lignin were quantified. Total biomass did not show differences between the materials studied at 45 days; however, biomass of cultivar AR was the lowest at 90 days of cultivation. At 45 days, the glucose and fructose contents of total shoot was significantly higher in ecotypes AS and BA than in cultivar MO. Regarding fructose content, significant differences were found in primary and secondary leaves between cultivars and ecotypes, highlighting the high content in AS ecotype. Sucrose levels followed a heterogeneous accumulation pattern in each tissue of aerial part; however, when tissues were analyzed together, AS, TA and AR stood out. In general, cellulose content in tissues were higher in the cultivar MO and lower in cultivar AS, a pattern also observed when whole aerial part was analyzed. Regarding lignin, there were no differences in levels of primary leaves and secondary stems, however, in secondary leaves there were significant differences between the cultivars MO and TA and, and in primary stems BA stood out due to its low content. In total aerial part, CA ecotype showed lower levels of lignin. In general, total content of sugars resulted mainly from the contribution of cellulose. The AS ecotype did accumulate more high levels of soluble sugars and starch than structural sugars. It was concluded that the TA cultivar and CA ecotype would be suitable to produce ethanol.  

2019
Dissertações
1
  • CICERA ÉDNA BARBOSA DAVID
  • IMPACTO DA RESTRIÇÃO CALÓRICA SOBRE O ESTRESSE OXIDATIVO E O CANAL MITOCONDRIAL DE POTÁSSIO SENSÍVEL AO ATP DURANTE A HIPERTROFIA CARDÍACA EM CAMUNDONGOS.

  • Orientador : HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • CLAUDIO GLEIDISTON LIMA DA SILVA
  • FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
  • HENRIQUE DOUGLAS MELO COUTINHO
  • IRWIN ROSE ALENCAR DE MENEZES
  • Data: 04/02/2019

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  • A hipertrofia cardíaca é uma resposta compensatória do coração frente a um aumento de volume ou pressão arterial. Embora seja uma resposta benéfica temporária, frequentemente, leva à cardiomiopatia hipertrófica e à insuficiência cardíaca congestiva. A restrição calórica (RC) é uma poderosa intervenção para melhoria da saúde e retardo do envelhecimento, seus efeitos envolvem melhora no metabolismo energético e estresse oxidativo, no qual as mitocôndrias desempenham um papel central. A mitocôndria possui um canal de potássio sensível a ATP (mitoKATP), cuja abertura leva a proteção celular através de mecanismos relacionados à diminuição do estresse oxidativo celular. Neste ensaio investigou-se o papel da RC na prevenção da hipertrofia cardíaca induzida pelo isoproterenol in vivo por evitar a produção de espécies reativas de oxigênio e manter a atividade antioxidante. Adicionalmente, investigou-se o envolvimento do mitoKATP na hipertrofia cardíaca. Afim de estabelecer um protocolo para indução da restrição calórica em camundongos, contabilizou-se (em gramas) o consumo de dieta padrão de camundongos Swiss durante 2 semanas. Após este período os animais foram divididos, aleatoriamente, em dois grupos: com ingestão ad libitum (grupo AL) e alimentado com 60% do consumo médio de calorias (grupo RC – calculado como anterioremente) durante 4 semanas adicionais. Para induzir hipertrofia cardíaca, os animais foram tratados com isoproterenol (ISO) (30 mg/ kg / dia) durante 8 dias. Para inibição do mitoKATP, bloqueadores, 5-hidroxidecanoato (5-HD) (10 mg / kg / dia) e glibenclamida (GLI) (6 mg/kg/dia) foram utilizados a partir do 5º dia. Camundongos tratados com ISO tiveram elevada relação peso do coração/ comprimento da tíbia e níveis aumentados de proteína cardíaca. Esses mesmos marcadores hipertróficos foram significantemente reduzidos em camundongos RC tratados com ISO. O tecido cardíaco de camundongos em restrição calórica, tratados com ISO produziram menos H2O2 e apresentaram menor oxidação de proteínas. Adicionalmente a RC bloqueou a repressão da atividade antioxidante, induzida pela hipertrofia, das enzimas superóxido dismutase, catalase e glutationa peroxidase. Notavelmente, demonstrou-se que a atividade do mitoKATP foi reprimida em mitocôndrias isoladas de corações hipertróficos, de maneira sensível à RC. Finalmente, como prova do princípio do envolvimento do mitoKATP na proteção contra a hipertrofia observou-se aqui que a inibição farmacológica do mitoKATP (usando 5-HD e GLI) bloqueou significantemente os efeitos protetores da RC. Juntos esses dados sugerem que a RC melhora o equilíbrio redox durante a hipertrofia cardíaca, e realiza esse processo em um mecanismo envolvendo a ativação do mitoKATP.


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  • Cardiac hypertrophy is a compensatory response of the heart to an increase in blood pressure or volume. Although it is a temporary beneficial response, it often leads to hypertrophic cardiomyopathy and congestive heart failure. Caloric restriction (CR) is a powerful intervention to improve health and delay of aging, its effects involve improve-ment in energy metabolism and oxidative stress, in which mitochondria play a central role. Mitochondria have an ATP-sensitive K+ channels (mitoKATP), whose opening leads to cellular protection through mechanisms related to the reduction of cellular oxidative stress. This paper investigated the role of CR in the prevention of isoproterenol-induced cardiac hypertrophy in vivo by preventing the production of reactive oxygen species and maintaining antioxidant activity. Additionally, we investigated the involvement of mi-toKATP in cardiac hypertrophy. In order to establish a protocol for induction of caloric restriction in mice, we counted (in grams) the standard diet consumption of Swiss mice for 2 weeks. After this period the animals were randomly divided into two groups: ad libitum (AL group) and fed with 60% of the average calorie intake (RC group - calculated as above) for an additional 4 weeks. To induce cardiac hypertrophy, mice were treated with isoproterenol (ISO) (30 mg / kg / day) for 8 days. For inhibition of mitoKATP, bloc-kers, 5-hydroxydecanoate (5-HD) (10 mg / kg / day) and glybenclamide (GLI) (6 mg / kg / day) were used from the 5th day. Isoproterenol-treated mice had elevated heart weight/tibia length ratios and cardiac protein levels. These gross hypertrophic markers were significantly reduced in CR mice. Cardiac tissue from isoproterenol-treated CR mice also produced less H2O2 and had lower protein sulfydryl oxidation. Additionally, calorie restriction blocked hypertrophic-induced antioxidant enzyme (catalase, superoxide dis-mutase and glutathione peroxidase) activity repression during cardiac hypertrophy. Re-markably, mitoKATP activity has been shown to be repressed in isolated mitochondria from hypertrophic hearts, in a manner sensitive to CR. Finally, as evidence of the princi-ple of mitoKATP involvement in protection against hypertrophy we found that pharmaco-logical inhibition of mitoKATP (using 5-HD and GLI) significantly blocked the protective effects of CR. Together these data suggest that CR improves redox balance during car-diac hypertrophy, and performs this process in a mechanism involving mitoKATP activation.

2018
Dissertações
1
  • ALINE MARIA BRITO LUCAS
  • PAPEL DO CANAL MITOCONDRIAL DE POTÁSSIO SENSÍVEL AO ATP NA PROTEÇÃO CONTRA O ESTRESSE OXIDATIVO DURANTE A HIPERTROFIA CARDÍACA IN VIVO
  • Orientador : HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
  • JUAN CARLOS ALVAREZ PIZARRO
  • HENRIQUE DOUGLAS MELO COUTINHO
  • IRWIN ROSE ALENCAR DE MENEZES
  • Data: 07/03/2018

  • Mostrar Resumo
  • A hipertrofia cardíaca é uma resposta compensatória do coração frente a um aumento de sobrecarga de pressão e/ou volume. Embora a hipertrofia cardíaca seja uma resposta benéfica temporária frequentemente leva a cardiomiopatia e insuficiência cardíaca congestiva. Neste trabalho foi testada a hipótese de que a abertura do canal mitocondrial de potássio sensível ao ATP (mitoKATP) usando diazóxido (DZX) promove proteção contra a hipertrofia cardíaca induzida por isoproterenol (ISO) in vivo. Para induzir hipertrofia cardíaca, camundongos (Mus musculus) linhagem Swiss foram tratados com ISO (intraperitonial – 30 mg / kg / dia) durante oito dias. A partir do quinto dia, foi administrado DZX (5 mg / kg / dia) para abrir mitoKATP e 5-hidroxidecanoato (5-HD) (5 mg / kg / dia) e glibenclamida (GLY) (3 mg/kg/dia) foi administrado como um bloqueador mitoKATP. Dimetilsulfóxido (DMSO) foi utilizado para diluir os fármacos DZX, 5-HD e GLY. Os animais tratados com ISO apresentaram elevação da relação peso cardíaco / comprimento da tíbia e aumento da área dos miócitos. Além disso, corações hipertróficos produziram níveis mais elevados de H2O2 e atividade diminuída da glutationa peroxidase (GPX) e da isoforma mitocondrial da superóxido dismutase que usa manganês como cofator (MnSOD). Houve também aumento da oxidação de proteínas e de lipídios. Em contraste, a abertura do mitoKATP com DZX bloqueou os efeitos negativos provocados pelo ISO, diminuindo a produção H2O2 e melhorando a atividade das enzimas antioxidantes GPX e MnSOD, consequentemente houve menor oxidação de proteínas e lipídios. Esses efeitos foram significativamente revertidos pelo 5-HD ou GLY. Mitocôndrias isoladas de corações hipertróficos foram mais susceptíveis ao aumento do volume mitocondrial induzido por Ca2+. A abertura de mitoKATP usando DZX foi acompanhada pela diminuição do volume mitocondrial, este efeito também foi bloqueado por 5-HD. Por outro lado, o tratamento com DZX não inverteu a supressão de atividade do complexo I induzida pela hipertrofia. Esses resultados mostram que a abertura do mitoKATP impede o desenvolvimento da hipertrofia cardíaca por ativação das enzimas antioxidantes, diminuição das espécies reativas de oxigênio e do dano mitocondrial. Palavras-chave: Mitocôndrias. Hipertrofia cardíaca. Canal mitocondrial de potássio sensível ao ATP. Espécies reativas de oxigênio. ABSTRACT Pathological cardiac hypertrophy is characterized by wall thickening or chamber enlargement of the heart in response to pressure or volume overload, respectively. Long term cardiac hypertrophy, despite being adaptive against hemodynamic overloads, often leads to cardiomyopathy and congestive heart failure. Here, we tested the hypothesis that mitochondrial ATP-sensitive potassium channel (mitoKATP) opening using diazoxide (DZX) will avoid isoproterenol-induced cardiac hypertrophy in vivo. To induce cardiac hypertrophy, Mus musculus Swiss mice were treated intraperitoneally with isoproterenol (ISO) (30 mg/kg/day) for eight days. From the fifth day DZX (5 mg/kg/day) was used to open mitoKATP and 5-hydroxydecanoate (5-HD) (5 mg/kg/day) or glibenclamide (GLY) (3 mg/kg/day) was administrated as a mitoKATP blocker. Dimethylsulfoxide (DMSO) was used to dilute DZX, 5-HD, GLY. The Isoproterenol-treated mice had elevated heart weight/tibia length ratios and increased myocyte cross-sectional areas. Additionally, hypertrophic hearts produced higher levels of H2O2 and had lower glutathione peroxidase (GPX) activity and mitochondrial isoform of superoxide dismutase using manganese as a cofactor (MnSOD). In contrast, mitoKATP opening with DZX blocked all negative ISO effects decreasing H2O2 production and improving the activity of the antioxidant enzymes GPX and MnSOD. Consistent with this we observed less oxidized proteins and lipids. These effects were all reversed by 5-HD or GLY. Isolated mitochondria from Isoproterenol-induced hypertrophic hearts had increased susceptibility to Ca2+-induced. MitokATP opening using DZX was accompanied by lower Ca2+-induced mitochondrial swelling, an effect blocked by 5-HD. On the other hand, DZX treatment did not reverse the suppression of mitochondrial complex I activity induced by hypertrophy. Our results suggest that mitoKATP opening prevents the development of cardiac hypertrophy by activation of antioxidant enzymes, avoiding oxidative impairment and mitochondrial damage.

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  • Pathological cardiac hypertrophy is characterized by wall thickening or chamber enlargement of the heart in response to pressure or volume overload, respectively. Long term cardiac hypertrophy, despite being adaptive against hemodynamic overloads, often leads to cardiomyopathy and congestive heart failure. Here, we tested the hypothesis that mitochondrial ATP-sensitive potassium channel (mitoKATP) opening using diazoxide (DZX) will avoid isoproterenol-induced cardiac hypertrophy in vivo. To induce cardiac hypertrophy, Mus musculus Swiss mice were treated intraperitoneally with isoproterenol (ISO) (30 mg/kg/day) for eight days. From the fifth day DZX (5 mg/kg/day) was used to open mitoKATP and 5-hydroxydecanoate (5-HD) (5 mg/kg/day) or glibenclamide (GLY) (3 mg/kg/day) was administrated as a mitoKATP blocker. Dimethylsulfoxide (DMSO) was used to dilute DZX, 5-HD, GLY. The Isoproterenol-treated mice had elevated heart weight/tibia length ratios and increased myocyte cross-sectional areas. Additionally, hypertrophic hearts produced higher levels of H2O2 and had lower glutathione peroxidase (GPX) activity and mitochondrial isoform of superoxide dismutase using manganese as a cofactor (MnSOD). In contrast, mitoKATP opening with DZX blocked all negative ISO effects decreasing H2O2 production and improving the activity of the antioxidant enzymes GPX and MnSOD. Consistent with this we observed less oxidized proteins and lipids. These effects were all reversed by 5-HD or GLY. Isolated mitochondria from Isoproterenol-induced hypertrophic hearts had increased susceptibility to Ca2+-induced. MitokATP opening using DZX was accompanied by lower Ca2+-induced mitochondrial swelling, an effect blocked by 5-HD. On the other hand, DZX treatment did not reverse the suppression of mitochondrial complex I activity induced by hypertrophy. Our results suggest that mitoKATP opening prevents the development of cardiac hypertrophy by activation of antioxidant enzymes, avoiding oxidative impairment and mitochondrial damage.
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