Banca de DEFESA: ANDREZA GENY DE ARAUJO ANDRADE

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : ANDREZA GENY DE ARAUJO ANDRADE
DATA : 30/07/2024
HORA: 14:00
LOCAL: Sala de Videoconferência - Faculdade de Medicina - UFCA
TÍTULO:

ANÁLISE DO ESTRESSE OXIDATIVO E COMPROMETIMENTO DO CRESCIMENTO INDUZIDOS POR FERRO E MANGANÊS EM Bacillus subtilis MUTANTE ppGpp0

PALAVRAS-CHAVES:

Palavras-chave: Bacillus subtilis, (p)ppGpp, Resposta adstringente, Carência nutricional

PÁGINAS: 62
RESUMO:

O Bacillus subtilis é uma bactéria Gram-positiva produtora de antibióticos lipopeptídicos com a função antibacteriana e antifúngica. É uma bactéria não patogênica em forma de bastonete, formadora de biofilme, endósporos e utilizada como microrganismo modelo para estudos relacionados às doenças infecciosas. Nessa bactéria é produzido o nucleotídeo penta/tetrafosfato de guanosina (p)ppGpp que participa em diversos processos celulares mas na situação de carência nutricional essas bactérias começam a sofrer alterações que ativam a produção de (p)ppGpp em quantidades maiores para a regulação metabólica. O objetivo deste estudo foi entender o impacto da ausência da síntese de tetrafosfato de guanosina (ppGpp0) no crescimento celular e na toxicidade do ferro/manganês sob estresse oxidativo em Bacillus subtilis. As cepas Bacillus subtilis PY79 e ppGpp0 foram cultivadas em 20 mL de meio LB Broth (Lennox) líquido com agitação ou em meio LB Broth (Lennox) sólido, ambos a 37 °C por 15 horas. O crescimento bacteriano foi medido na ausência ou presença de sulfato de ferro (FeSO4) e sulfato de manganês (MnSO4) em diferentes concentrações, a cada hora, durante 10 horas. Os níveis de peróxido de hidrogênio (H2O2) foram detectados usando AmplexRed/Peroxidase de rábano, e as atividades das enzimas antioxidantes (catalase e superóxido dismutase) foram avaliadas. A respiração celular foi medida usando um eletrodo tipo Clark. Os testes demonstraram que os mutantes ppGpp0 apresentaram um atraso no crescimento em relação ao controle PY79, e nenhuma das células cresceu em FeSO4 na concentração de 4 mM. Em concentrações igual ou inferiores a 1 mM de FeSO4, o Bacillus subtilis tolerou bem. No entanto, comparado ao tipo selvagem (PY79), a cepa mutante ppGpp0 exibiu uma sensibilidade significativamente aumentada a FeSO4, mostrando atraso na entrada na fase exponencial de crescimento. O mutante ppGpp0 produziu maiores níveis de H2O2 (na fase estacionária) quando estimulado por FeSO4 (2 mM). O estresse induzido por MnSO4 causou um aumento acentuado na fase de latência do crescimento celular em Bacillus subtilis mutantes para ppGpp0. A presença desses metais induziu um incremento no consumo de oxigênio comparado às cepas sem FeSO4, e MnSO4. As enzimas antioxidantes não apresentaram diferenças significativas nas atividades. Conclui-se que os estudos comparativos entre as cepas de Bacillus subtilis PY79 e ppGpp0 foram fundamentais para confirmar que a ausência do nucleotídeo ppGpp compromete significativamente o crescimento bacteriano, resultando em um atraso notável durante toda a fase exponencial em presença de concentrações altas de Fe2+ e Mn2+. Além disso, a limitação do crescimento celular por Fe2+ é através de um mecanismo relacionado ao estado redox.

MEMBROS DA BANCA:
Interno - FRANCISCO NASCIMENTO PEREIRA JUNIOR
Presidente - HEBERTY DI TARSO FERNANDES FACUNDO
Externa à Instituição - JANAÍNA ESMERALDO ROCHA
Interna - MARIA ELIZABETH PEREIRA NOBRE